МОСКВА, 6 дек — РИА Новости, Татьяна Пичугина. Недавняя публикация ученых из Сеченовского университета о том, что почти половина анализов на возбудителя COVID-19 не дают реальной картины, вызвала множество вопросов. Насколько точны ПЦР-тесты и нужны ли они для диагноза? РИА Новости разбирается в ПЦР-диагностике и почему в нее закрадываются ошибки.
Как выявляют вирус в организме
«Тяжело заболел наш сотрудник. Поднялась высокая температура, положили в больницу. Все признаки COVID-19, — рассказывает Алексей Чемерис, доктор биологических наук, профессор, сотрудник Института биохимии и генетики Уфимского ФИЦ РАН. — А ПЦР-анализ, который ему сделали в специальном медицинском центре наши коллеги-профессионалы, как только он почувствовал недомогание, — отрицательный. Видимо, в тот момент у больного было мало вирусных частиц в организме — за пределами чувствительности теста».
Ученые называют такие результаты ложнонегативными — инфекция проявляется внешне, а тест на возбудителя — «чистый». Тут дело и в самом методе, и в его массовом применении.
Когда медсестра берет мазок из ротоглотки и носоглотки, на кончике зонда остается немного влаги, а в ней — клетки эпителия. Зонд опускают в пластиковую пробирку с раствором (эппендорф) и кончик отламывают, чтобы закрыть емкость. В лаборатории ее помещают в центрифугу, проводят ряд манипуляций для выделения из клеток фрагментов вирусного генома. В случае с COVID-19 — это РНК коронавируса SARS-CoV-2.
В образовавшийся раствор добавляют праймеры — искусственные участки генома коронавируса, именно они опознают SARS-CoV-2, и один из них служит затравкой для синтеза цепочки ДНК под действием определенного фермента на основе механизма обратной транскрипции. Фактически получается ДНК-копия участка коронавируса, которую уже можно размножать. Для этого запускают ПЦР — полимеразную цепную реакцию. За несколько десятков циклов она увеличивает число копий ДНК, а специальный флуоресцентный краситель подсвечивает их в пробирке, сигнализируя о вирусе. Если в биоматериале нет вирусных частиц, ампликонов (продуктов ПЦР) не будет вовсе, результат — отрицательный. Если вируса очень мало, итоговое количество ампликонов по завершении ПЦР окажется за пределами чувствительности прибора и результат — ложноотрицательным.
Тонкости метода
В ПЦР-диагностике много нюансов, объясняет Алексей Чемерис. В лаборатории для научных целей выявляют даже единичные копии вирусного генома в образце, при массовом применении чувствительность обычно на порядки ниже.
«Из-за случайных мутаций генома праймеры могут не сработать, если однонуклеотидные замены или даже более значительные изменения генома вируса пришлись как раз на эти участки. Вероятность невысока, но она есть», — отмечает ученый.
Возможны сбои при ручных операциях, которых не так много. Одна из них — извлечение вирусной РНК из образца. Автоматический экстрактор нуклеиновых кислот стоит довольно дорого, поэтому обычно эту процедуру доверяют лаборанту. Редко, но ложноположительные результаты случаются, в том числе из-за особенностей ПЦР или загрязнения образца.
Чаще всего, однако, проблемы возникают до того, как пробирка попала в лабораторию. Вот что пишут авторы статьи в журнале «Вестник Росздравнадзора»: «В настоящее время имеются неопровержимые доказательства того, что преаналитическая фаза является основным источником ошибок в лабораторных исследованиях, когда они используются для диагностических или исследовательских целей». Они публикуют целый список нарушений, ведущих к ложноотрицательным результатам.
Ключевой этап — подготовка к исследованию. «За три часа до анализа нельзя есть, пить, курить и полоскать рот. Дело в том, что коронавирус поражает клетки слизистой оболочки дыхательных путей. Проникая в них, он начинает размножаться, накапливается на их поверхности. Но есть еще и эпителиальные клетки, которые часто обновляются. Вместе с водой, едой и избытком слюны при курении и жевании жвачки эпителиальные клетки попадают в пищевод. В результате вероятность обнаружить вирус в мазке падает практически до нуля», — комментирует Тамара Силкина, врач клинической лабораторной диагностики, директор по лабораторным технологиям «Гемотеста».
Не менее важна процедура взятия биоматериала. Если неверно выбрать точку для мазка, например, из-за кашля или рвотного рефлекса, на зонд может не попасть достаточное количество клеток. На результат также влияют нарушения технологии хранения, транспортировки образцов.
«Цена ошибки очень высока — процент выявляемости коронавирусной инфекции снизится, а скорость ее распространения вырастет. Люди, получившие ложноотрицательные результаты, будут чувствовать себя спокойно, выходить в общественные места и контактировать с окружающими», — уточняет представитель «Гемотеста».
Ключевой этап — подготовка к исследованию. «За три часа до анализа нельзя есть, пить, курить и полоскать рот. Дело в том, что коронавирус поражает клетки слизистой оболочки дыхательных путей. Проникая в них, он начинает размножаться, накапливается на их поверхности. Но есть еще и эпителиальные клетки, которые часто обновляются. Вместе с водой, едой и избытком слюны при курении и жевании жвачки эпителиальные клетки попадают в пищевод. В результате вероятность обнаружить вирус в мазке падает практически до нуля», — комментирует Тамара Силкина, врач клинической лабораторной диагностики, директор по лабораторным технологиям «Гемотеста».
Не менее важна процедура взятия биоматериала. Если неверно выбрать точку для мазка, например, из-за кашля или рвотного рефлекса, на зонд может не попасть достаточное количество клеток. На результат также влияют нарушения технологии хранения, транспортировки образцов.
«Цена ошибки очень высока — процент выявляемости коронавирусной инфекции снизится, а скорость ее распространения вырастет. Люди, получившие ложноотрицательные результаты, будут чувствовать себя спокойно, выходить в общественные места и контактировать с окружающими», — уточняет представитель «Гемотеста».
О точности диагностики
В России одобрены к использованию десятки тест-систем для выявления коронавируса. Ключевые характеристики — диагностические специфичность (точность) и чувствительность. Первый параметр показывает способность набора определить конкретный вирус. Второй — возможность обнаружить его части, даже если в биоматериале их очень мало. «Чем эти параметры ближе к ста процентам, тем лучше», — подчеркивает Тамара Силкина.
«Порог чувствительности — общий как для российских, так и для зарубежных тестов: 10³ на миллилитр. То есть должно быть не менее тысячи вирусных геном-эквивалентов на миллилитр образца. «ДНК-технология» заявила о чувствительности 10¹ — десять вирусных единиц на миллилитр. Другой важный показатель — воспроизводимость, то есть возможность получить одинаковый результат в разных условиях. Нужно учитывать и сходимость — отсутствие существенных различий между измерениями, выполненными в одинаковых условиях», — добавляет медик.
Метод ПЦР с обратной транскрипцией хорошо отработан и практически полностью автоматизирован. С момента попадания в лабораторию анализ занимает четыре-шесть часов. В мире эти тесты буквально поставили на поток. Только в Москве, по официальным данным, сделали 12 миллионов анализов.
Поскольку этот метод прямо выявляет возбудителя в организме, его относят к доказательной медицине и рекомендуют учитывать в клинической практике. Однако анализ больших данных говорит, что при массовом использовании ПЦР-тесты часто промахиваются.
Ложнонегативные результаты получаются в 20-66 процентах случаев. Такие данные из литературы приводят исследователи из Сеченовского университета. Вместе с зарубежными коллегами они изучили записи пациентов, госпитализированных в университетскую клинику в апреле — мае. Из 3480 человек, чьи ПЦР-тесты были доступны, примерно половина оказались чистыми. В то же время клиническая картина и КТ легких указывали на коронавирусную инфекцию. Авторы допускают, что в реальной клинической практике ПЦР-анализ не столь и критичен.
«Этиологическая диагностика, которая выявляет причину заболевания, нужна априори, — не соглашается Айрат Мавзютов, заведующий кафедрой фундаментальной и прикладной микробиологии, профессор кафедры лабораторной диагностики Башкирского государственного медицинского университета, руководитель Исследовательского центра «Лаборатория». — При вирусных инфекциях других, сравнимых по чувствительности и специфичности (точности), методов, кроме ПЦР-тестирования, нет».
Важно понимать, объясняет профессор Мавзютов, что клинический диагноз опирается на субъективные данные — анамнез (опрос) и осмотр пациента. На их основании невозможно установить вирусную природу заболевания и тем более какой именно возбудитель его вызвал. Для этого проводятся лабораторные исследования. Получаемые при этом данные, продолжает ученый, намного объективнее, поскольку большинство современных методов лабораторных исследований автоматизировано. Соответственно, на результаты не повлияют случайные факторы: уровень подготовки специалистов, их настроение, «погода в доме» и так далее.
«Диагноз COVID-19 можно поставить, только когда в материале от больного обнаружили РНК вируса SARS CoV-2 методом ПЦР или же антигены этого вируса иммунохимическими методами. Не выявив следов вируса в организме, нельзя говорить о «ковидной» природе заболевания или летального исхода», — утверждает Айрат Мавзютов.
Он обращает внимание на еще один аспект. ПЦР-тест не отличает РНК вируса, способного к репродукции, то есть размножению, от обломков «нежизнеспособных» вирусных частиц. Он лишь позволяет понять, присутствует или нет РНК коронавируса в клетках.
«Пока инфицированные клетки не заменятся на новые, а на это уходит от двух до четырех недель, не исключены положительные результаты. При этом вирус может быть уже «мертвым», человек здоров и никому не опасен», — отмечает профессор. Для уточнения учитываются данные целого ряда дополнительных исследований, позволяющих на лабораторном уровне оценивать остроту воспалительного процесса или образование антител на стадии его завершения.
Альтернатива ПЦР-диагностике
В любом случае нужно повышать чувствительность тест-систем на основе ПЦР, заключает Алексей Чемерис, а для этого нужны другие подходы. «Надо сделать так, чтобы ложнонегативных результатов было меньше, практически исключить их», — считает он.
В обзоре, подготовленном вместе с коллегами, профессор Чемерис рассматривает преимущества и недостатки ПЦР-диагностики и других методов амплификации — копировании РНК бетакоронавирусов, к которым относится SARS-CoV-2. Теоретически весьма перспективен метод петлевой амплификации — LAMP, где используют сразу шесть или восемь праймеров.
«С одной стороны, повышается специфичность: только когда все праймеры отожгутся (сработают, распознав РНК коронавируса. — Прим. ред.), начнется амплификация, с другой — вирус мутирует и шансы, что реакция не пойдет, увеличиваются, поскольку какие бы участки генома ни выбрать, все равно вероятность мутаций больше в восьми участках, чем в двух или трех (при использовании гибридизационного зонда), достаточных для ПЦР», — объясняет исследователь.
Во время предшествующей эпидемии SARS возбудителя выявляли с помощью реакции NASBA (амплификации на основе секвенирования нуклеиновых кислот) и RCA (репликации по типу катящегося кольца). Геномный редактор CRISPR-Cas также пробуют применять для идентификации РНК нового коронавируса. Есть работы по полногеномному секвенированию любого генетического материала, находящегося в биоматериале. Метод очень чувствительный, но дорогой и долгий — занимает 20 часов. Так что в ближайшее время ПЦР с обратной транскрипцией останется самым массовым способом обнаружения коронавируса в организме.
Тесты ПЦР ошибаются более чем в половине случаев, поэтому опираться на них при диагностике коронавируса нельзя. К такому выводу пришли специалисты Сеченовского университета, которые совместно с коллегами из других стран провели масштабное исследование проблемы диагностики COVID-19 в России и изучили течение заболевания у двух групп пациентов. В выборку вошли 3,5 тыс. больных. У половины из них наличие вируса было подтверждено лабораторным тестом, у остальных же были отрицательные результаты, но специфические симптомы и состояние легких указывали на COVID-19. Ранее о низкой информативности тестов ПЦР заявляли специалисты Минздрава, но цифры, приведенные ими, были ниже: по сведениям министерства, ошибочно 30–40% таких анализов. В Роспотребнадзоре «Известиям» сообщили, что чаще всего причиной нарушения технологии взятия теста становится человеческий фактор.
Ложные надежды
ПЦР-метод, используемый для выявления РНК коронавируса, дает высокий процент ложноотрицательных результатов, что делает необходимым поиск альтернативных способов диагностики COVID-19. Поэтому при постановке диагноза следует прежде всего учитывать симптомы и характер поражения легких. Об этом свидетельствуют результаты исследования международной группы ученых, которое прошло под руководством специалистов Сеченовского университета. Соответствующая научная статья опубликована в журнале Clinical Infectious Diseases.
Ученые сравнили течение COVID-19 у двух групп пациентов — с положительным результатом теста и с характерными симптомами, но без лабораторного подтверждения инфекции. Авторы изучили истории болезни 3480 человек, поступивших в больницы Сеченовского университета в апреле и мае. У половины (1728 больных) наличие вируса было подтверждено лабораторным ПЦР, у остальных (1748) не было надежного результата (тест отрицателен или результаты не определены), но специфические признаки и состояние легких указывали на заражение коронавирусом.
Специалистов интересовали демографические и физические характеристики (пол, возраст, рост, вес), наличие у пациентов сопутствующих заболеваний и данные компьютерной томографии (КТ) — в частности, объем поражения легких и характерные для COVID-19 изменения по типу «матового стекла».
Фото: ИЗВЕСТИЯ/Зураб Джавахадзе
Чаще всего в больницы с COVID-19 попадали люди среднего и старшего возраста (45–66 лет). Большинство пациентов (76%) находились в состоянии средней степени тяжести. Почти у всех на момент поступления в больницу была высокая температура, у многих слабость и кашель, а КТ показывала значительные изменения тканей легких. Потеря обоняния, боль в горле и мышцах, лихорадка чаще встречались у тех, кто потом выздоровел и выписался, а одышка и спутанность сознания — у пациентов, которые в итоге не смогли справиться с болезнью.
Статистически значимых различий в симптомах пациентов, чей диагноз был выставлен по результатам теста ПЦР и на основе клинической картины, обнаружено не было, сообщил «Известиям» профессор кафедры педиатрии и детских инфекционных болезней Сеченовского университета, первый автор статьи Даниил Мунблит.
— Важность нашего исследования заключается еще и в том, что из России вышли прозрачные и качественные данные, демонстрирующие, что многие аспекты течения коронавирусной инфекции мало отличаются от того, что видят коллеги в других странах. Статистика в большинстве стран не учитывает людей, у которых COVID-19 не подтвержден лабораторно. Таким образом, можно предположить, что число людей, переболевших или умерших от COVID-19, существенно больше, — рассказал Даниил Мунблит.
Фото: ИЗВЕСТИЯ/Дмитрий Коротаев
Таким образом, заключают авторы работы, если альтернативного объяснения характерным симптомам нет, они являются достаточным основанием для постановки диагноза и выбора тактики лечения даже при отсутствии положительного теста ПЦР.
Наличие положительного теста не оказывает также статистически значимого влияния на течение заболевания и шансы выжить. Вероятность смертельного исхода оказалась выше у пациентов мужского пола и старшего возраста, а также у людей с болезнями почек или сердца, диабетом и деменцией.
Принять решение
Далеко не всегда есть необходимость ориентироваться на ПЦР-тесты. Гораздо важнее оценка клинической картины, сообщил «Известиям» профессор-исследователь Балтийского федерального университета имени Канта Андрей Продеус.
— Глобально эта статья важна в том, что впервые для России это было доказано клинически на большой выборке пациентов. Нужно понимать: если тест позитивен, это говорит о наличии патогена, но если он негативен, это не означает, что вируса в организме нет. Поэтому ориентироваться на клинические признаки, такие как одышка, температура и кашель, важнее, — пояснил он.
Фото: РИА Новости/Антон Вергун
Более того, во время пандемии вклад других заболеваний, вызывающих вирусную пневмонию и дающих картину «матового стекла» на КТ, весьма ограничен, сообщил в разговоре с «Известиями» директор научно-клинического центра прецизионной и регенеративной медицины Казанского федерального университета (вуза — участника проекта «5-100») Альберт Ризванов.
— Логично предположить, что большинство пациентов, независимо от результатов тестирования, но демонстрирующих типичную клиническую картину, страдают именно COVID-19. Поэтому результаты исследования вполне логичны, — подчеркнул специалист. — Безусловно, важно, что в России проводятся такие качественные широкомасштабные исследования, которые в целом очень полезны как для наших врачей, так и для зарубежных коллег.
Ранее главный внештатный пульмонолог Минздрава России Сергей Авдеев заявил СМИ, что примерно в 30–40% случаев тест на коронавирус может дать ложноотрицательный результат. По его словам, это не связано с качеством самих тестов. Он подчеркнул, что чувствительность и специфичность тест-систем не подвергается никакому сомнению, а проблема заключается в некачественном взятии биоматериалов.
Фото: ТАСС/Артем Геодакян
Что же касается новых полученных клинических данных, «Известия» направили запрос в Минздрав РФ с вопросом о том, будут ли они как-то приняты во внимание, однако получить ответ на момент публикации не удалось. В Роспотребнадзоре редакции сообщили, что причины ошибок тестов могут быть разные: наличие «похожего» по структуре, родственного возбудителя, слишком малое его количество и так далее.
— Нарушения при подготовке пациента чаще всего приводят к ложноотрицательным результатам. Например, при взятии мазка на коронавирус пациент должен не менее трех часов ничего не есть и не пить, не полоскать горло. При несоблюдении этих правил можно просто «смыть» вирус и результат будет отрицательным, — сообщили в ведомстве. — Нарушение технологии выполнения анализа встречается сейчас очень редко, чаще всего это «человеческий фактор»: случайно перепутали пробу, отвлеклись и ввели результат не в ту ячейку и т.д. Во всех лабораториях ведется специальный внутрилабораторный контроль качества, который позволяет выловить такие ошибки до выдачи результата.
В исследовании Сеченовского университета сказано, что полученные результаты аналогичны данным по США, где от 42 до 51,8% людей получают ложноотрицательный результат теста ПЦР. В целом же уровень таких результатов колеблется от 20 до 66% — в зависимости от давности появления симптомов, поэтому результаты должны быть интерпретированы с осторожностью.
Фото: ТАСС/Антон Новодережкин
Помимо российских ученых, в исследовании приняли участие сотрудники Имперского колледжа Лондона, Пизанского университета, Университета Отто фон Герике в Магдебурге и Оксфордского университета.
Пандемия коронавируса ,
05 ноя 2020, 14:17
0
До 40% результатов тестов на коронавирус могут быть ошибочными, рассказал главный внештатный пульмонолог Минздрава. Основная проблема — то, насколько качественно проводился забор материала
До 30–40% теcтов на COVID-19 могут оказаться ошибочными и давать ложноотрицательный результат. Об этом, как передает «РИА Новости», заявил главный внештатный пульмонолог Минздрава России Сергей Авдеев.
Он пояснил, что такие ошибки связаны с проблемами при заборе материалов, которые используются в тестировании. «Проблема не в качестве тестов — проблема во взятии материалов. Если материал взят некачественно, к сожалению, мы имеем шанс получить ложноотрицательный результат», — рассказал Авдеев.
Авдеев уточнил, что точность результата теста зависит еще и от того, когда именно он был взят. На ранней стадии вероятность получить положительный результат больше. Решение о повторном проведении теста может принять только врач, отметил он.
В то же время, добавил эксперт, даже если тест оказался ошибочным и не показал коронавирус, но симптомы все равно говорят о COVID-19, тактика лечения все равно не поменяется. «Относительно возможных ошибочных результатов ПЦР-тестирования хотел бы добавить, что при наличии выраженных симптомов, клинических проявлений COVID-19 результаты ПЦР-тестирования не влияют на тактику ведения пациентов», — сказал он.
В июле директор Института здравоохранения ВШЭ Лариса Попович рассказывала РБК, что применявшиеся на тот момент тесты российского производства сами по себе обладали точностью в районе 96%. «Некоторые тесты недостаточно чувствительны и могут не заметить небольшое количество антител. Иногда все зависит от того, как выстроен процесс тестирования. Если тесты неудачно выбирают антиген, они могут заметить остаточные следы других вирусов», — рассказывала Попович о возможных недостатках тестирования. Попович отметила, что в России применяются 16 тестов на коронавирус с разной чувствительностью. «Безусловно, у каждого теста есть ограничения на степень его способности обнаруживать вирус и правильно его определять. Иногда бывают ложные результаты, потому что неудачно выбрали кусочек генома. Китайские тесты грешили с этим с самого начала», — сказала ученый.
Как меняется число новых случаев заражения Covid-19 в России
Источник: федеральный и региональные оперштабы по борьбе с коронавирусом
Данные по России i
В мае доктор биологических наук, профессор Школы системной биологии GMU (США) Анча Баранова заявила, что тесты на коронавирус и антитела к нему могут давать ложные результаты на любых стадиях заболевания. Например, организм человека может сам побороть инфекцию без выработки антител за счет естественных интерферонов. В таком случае тест на антитела даст отрицательный результат, хотя человек уже переболел COVID-19. Тест на коронавирус может быть ложноотрицательным, если после приема противовирусных препаратов инфекция будет побеждена, но пневмония продолжит развиваться.
https://ria.ru/20201206/ptsr-1586583720.html
«Цена ошибки высока». От чего зависит результат ПЦР-тестов на коронавирус
«Цена ошибки высока». От чего зависит результат ПЦР-тестов на коронавирус — РИА Новости, 06.12.2020
«Цена ошибки высока». От чего зависит результат ПЦР-тестов на коронавирус
Недавняя публикация ученых из Сеченовского университета о том, что почти половина анализов на возбудителя COVID-19 не дают реальной картины, вызвала множество… РИА Новости, 06.12.2020
2020-12-06T08:00
2020-12-06T08:00
2020-12-06T08:09
наука
здоровье
коронавирус covid-19
коронавирус в россии
биология
днк
геном
коронавирус sars
/html/head/meta[@name=’og:title’]/@content
/html/head/meta[@name=’og:description’]/@content
https://cdnn21.img.ria.ru/images/07e4/07/10/1574444596_0:100:3072:1828_1920x0_80_0_0_742cac6650983368c665cfe1caa14d59.jpg
МОСКВА, 6 дек — РИА Новости, Татьяна Пичугина. Недавняя публикация ученых из Сеченовского университета о том, что почти половина анализов на возбудителя COVID-19 не дают реальной картины, вызвала множество вопросов. Насколько точны ПЦР-тесты и нужны ли они для диагноза? РИА Новости разбирается в ПЦР-диагностике и почему в нее закрадываются ошибки. Как выявляют вирус в организме»Тяжело заболел наш сотрудник. Поднялась высокая температура, положили в больницу. Все признаки COVID-19, — рассказывает Алексей Чемерис, доктор биологических наук, профессор, сотрудник Института биохимии и генетики Уфимского ФИЦ РАН. — А ПЦР-анализ, который ему сделали в специальном медицинском центре наши коллеги-профессионалы, как только он почувствовал недомогание, — отрицательный. Видимо, в тот момент у больного было мало вирусных частиц в организме — за пределами чувствительности теста».Ученые называют такие результаты ложнонегативными — инфекция проявляется внешне, а тест на возбудителя — «чистый». Тут дело и в самом методе, и в его массовом применении.Когда медсестра берет мазок из ротоглотки и носоглотки, на кончике зонда остается немного влаги, а в ней — клетки эпителия. Зонд опускают в пластиковую пробирку с раствором (эппендорф) и кончик отламывают, чтобы закрыть емкость. В лаборатории ее помещают в центрифугу, проводят ряд манипуляций для выделения из клеток фрагментов вирусного генома. В случае с COVID-19 — это РНК коронавируса SARS-CoV-2.В образовавшийся раствор добавляют праймеры — искусственные участки генома коронавируса, именно они опознают SARS-CoV-2, и один из них служит затравкой для синтеза цепочки ДНК под действием определенного фермента на основе механизма обратной транскрипции. Фактически получается ДНК-копия участка коронавируса, которую уже можно размножать. Для этого запускают ПЦР — полимеразную цепную реакцию. За несколько десятков циклов она увеличивает число копий ДНК, а специальный флуоресцентный краситель подсвечивает их в пробирке, сигнализируя о вирусе. Если в биоматериале нет вирусных частиц, ампликонов (продуктов ПЦР) не будет вовсе, результат — отрицательный. Если вируса очень мало, итоговое количество ампликонов по завершении ПЦР окажется за пределами чувствительности прибора и результат — ложноотрицательным. Тонкости методаВ ПЦР-диагностике много нюансов, объясняет Алексей Чемерис. В лаборатории для научных целей выявляют даже единичные копии вирусного генома в образце, при массовом применении чувствительность обычно на порядки ниже.»Из-за случайных мутаций генома праймеры могут не сработать, если однонуклеотидные замены или даже более значительные изменения генома вируса пришлись как раз на эти участки. Вероятность невысока, но она есть», — отмечает ученый.Возможны сбои при ручных операциях, которых не так много. Одна из них — извлечение вирусной РНК из образца. Автоматический экстрактор нуклеиновых кислот стоит довольно дорого, поэтому обычно эту процедуру доверяют лаборанту. Редко, но ложноположительные результаты случаются, в том числе из-за особенностей ПЦР или загрязнения образца.Чаще всего, однако, проблемы возникают до того, как пробирка попала в лабораторию. Вот что пишут авторы статьи в журнале «Вестник Росздравнадзора»: «В настоящее время имеются неопровержимые доказательства того, что преаналитическая фаза является основным источником ошибок в лабораторных исследованиях, когда они используются для диагностических или исследовательских целей». Они публикуют целый список нарушений, ведущих к ложноотрицательным результатам. Ключевой этап — подготовка к исследованию. «За три часа до анализа нельзя есть, пить, курить и полоскать рот. Дело в том, что коронавирус поражает клетки слизистой оболочки дыхательных путей. Проникая в них, он начинает размножаться, накапливается на их поверхности. Но есть еще и эпителиальные клетки, которые часто обновляются. Вместе с водой, едой и избытком слюны при курении и жевании жвачки эпителиальные клетки попадают в пищевод. В результате вероятность обнаружить вирус в мазке падает практически до нуля», — комментирует Тамара Силкина, врач клинической лабораторной диагностики, директор по лабораторным технологиям «Гемотеста».Не менее важна процедура взятия биоматериала. Если неверно выбрать точку для мазка, например, из-за кашля или рвотного рефлекса, на зонд может не попасть достаточное количество клеток. На результат также влияют нарушения технологии хранения, транспортировки образцов.»Цена ошибки очень высока — процент выявляемости коронавирусной инфекции снизится, а скорость ее распространения вырастет. Люди, получившие ложноотрицательные результаты, будут чувствовать себя спокойно, выходить в общественные места и контактировать с окружающими», — уточняет представитель «Гемотеста».О точности диагностикиВ России одобрены к использованию десятки тест-систем для выявления коронавируса. Ключевые характеристики — диагностические специфичность (точность) и чувствительность. Первый параметр показывает способность набора определить конкретный вирус. Второй — возможность обнаружить его части, даже если в биоматериале их очень мало. «Чем эти параметры ближе к ста процентам, тем лучше», — подчеркивает Тамара Силкина.»Порог чувствительности — общий как для российских, так и для зарубежных тестов: 10³ на миллилитр. То есть должно быть не менее тысячи вирусных геном-эквивалентов на миллилитр образца. «ДНК-технология» заявила о чувствительности 10¹ — десять вирусных единиц на миллилитр. Другой важный показатель — воспроизводимость, то есть возможность получить одинаковый результат в разных условиях. Нужно учитывать и сходимость — отсутствие существенных различий между измерениями, выполненными в одинаковых условиях», — добавляет медик.Метод ПЦР с обратной транскрипцией хорошо отработан и практически полностью автоматизирован. С момента попадания в лабораторию анализ занимает четыре-шесть часов. В мире эти тесты буквально поставили на поток. Только в Москве, по официальным данным, сделали 12 миллионов анализов.Поскольку этот метод прямо выявляет возбудителя в организме, его относят к доказательной медицине и рекомендуют учитывать в клинической практике. Однако анализ больших данных говорит, что при массовом использовании ПЦР-тесты часто промахиваются.Ложнонегативные результаты получаются в 20-66 процентах случаев. Такие данные из литературы приводят исследователи из Сеченовского университета. Вместе с зарубежными коллегами они изучили записи пациентов, госпитализированных в университетскую клинику в апреле — мае. Из 3480 человек, чьи ПЦР-тесты были доступны, примерно половина оказались чистыми. В то же время клиническая картина и КТ легких указывали на коронавирусную инфекцию. Авторы допускают, что в реальной клинической практике ПЦР-анализ не столь и критичен.»Этиологическая диагностика, которая выявляет причину заболевания, нужна априори, — не соглашается Айрат Мавзютов, заведующий кафедрой фундаментальной и прикладной микробиологии, профессор кафедры лабораторной диагностики Башкирского государственного медицинского университета, руководитель Исследовательского центра «Лаборатория». — При вирусных инфекциях других, сравнимых по чувствительности и специфичности (точности), методов, кроме ПЦР-тестирования, нет».Важно понимать, объясняет профессор Мавзютов, что клинический диагноз опирается на субъективные данные — анамнез (опрос) и осмотр пациента. На их основании невозможно установить вирусную природу заболевания и тем более какой именно возбудитель его вызвал. Для этого проводятся лабораторные исследования. Получаемые при этом данные, продолжает ученый, намного объективнее, поскольку большинство современных методов лабораторных исследований автоматизировано. Соответственно, на результаты не повлияют случайные факторы: уровень подготовки специалистов, их настроение, «погода в доме» и так далее.»Диагноз COVID-19 можно поставить, только когда в материале от больного обнаружили РНК вируса SARS CoV-2 методом ПЦР или же антигены этого вируса иммунохимическими методами. Не выявив следов вируса в организме, нельзя говорить о «ковидной» природе заболевания или летального исхода», — утверждает Айрат Мавзютов.Он обращает внимание на еще один аспект. ПЦР-тест не отличает РНК вируса, способного к репродукции, то есть размножению, от обломков «нежизнеспособных» вирусных частиц. Он лишь позволяет понять, присутствует или нет РНК коронавируса в клетках. «Пока инфицированные клетки не заменятся на новые, а на это уходит от двух до четырех недель, не исключены положительные результаты. При этом вирус может быть уже «мертвым», человек здоров и никому не опасен», — отмечает профессор. Для уточнения учитываются данные целого ряда дополнительных исследований, позволяющих на лабораторном уровне оценивать остроту воспалительного процесса или образование антител на стадии его завершения.Альтернатива ПЦР-диагностикеВ любом случае нужно повышать чувствительность тест-систем на основе ПЦР, заключает Алексей Чемерис, а для этого нужны другие подходы. «Надо сделать так, чтобы ложнонегативных результатов было меньше, практически исключить их», — считает он.В обзоре, подготовленном вместе с коллегами, профессор Чемерис рассматривает преимущества и недостатки ПЦР-диагностики и других методов амплификации — копировании РНК бетакоронавирусов, к которым относится SARS-CoV-2. Теоретически весьма перспективен метод петлевой амплификации — LAMP, где используют сразу шесть или восемь праймеров.»С одной стороны, повышается специфичность: только когда все праймеры отожгутся (сработают, распознав РНК коронавируса. — Прим. ред.), начнется амплификация, с другой — вирус мутирует и шансы, что реакция не пойдет, увеличиваются, поскольку какие бы участки генома ни выбрать, все равно вероятность мутаций больше в восьми участках, чем в двух или трех (при использовании гибридизационного зонда), достаточных для ПЦР», — объясняет исследователь.Во время предшествующей эпидемии SARS возбудителя выявляли с помощью реакции NASBA (амплификации на основе секвенирования нуклеиновых кислот) и RCA (репликации по типу катящегося кольца). Геномный редактор CRISPR-Cas также пробуют применять для идентификации РНК нового коронавируса. Есть работы по полногеномному секвенированию любого генетического материала, находящегося в биоматериале. Метод очень чувствительный, но дорогой и долгий — занимает 20 часов. Так что в ближайшее время ПЦР с обратной транскрипцией останется самым массовым способом обнаружения коронавируса в организме.
https://ria.ru/20200507/1571041644.html
https://ria.ru/20201201/koronavirus-1587118633.html
https://ria.ru/20201124/kovid-1586064272.html
РИА Новости
internet-group@rian.ru
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
2020
РИА Новости
internet-group@rian.ru
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
Новости
ru-RU
https://ria.ru/docs/about/copyright.html
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/
РИА Новости
internet-group@rian.ru
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
https://cdnn21.img.ria.ru/images/07e4/07/10/1574444596_333:0:2821:1866_1920x0_80_0_0_a8001e2de8c56b736340a788be0cfca5.jpg
РИА Новости
internet-group@rian.ru
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
РИА Новости
internet-group@rian.ru
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
здоровье, коронавирус covid-19, коронавирус в россии, биология, днк, геном, коронавирус sars
Наука, Здоровье, Коронавирус COVID-19, Коронавирус в России, биология, ДНК, геном, Коронавирус SARS
МОСКВА, 6 дек — РИА Новости, Татьяна Пичугина. Недавняя публикация ученых из Сеченовского университета о том, что почти половина анализов на возбудителя COVID-19 не дают реальной картины, вызвала множество вопросов. Насколько точны ПЦР-тесты и нужны ли они для диагноза? РИА Новости разбирается в ПЦР-диагностике и почему в нее закрадываются ошибки.
Как выявляют вирус в организме
«Тяжело заболел наш сотрудник. Поднялась высокая температура, положили в больницу. Все признаки COVID-19, — рассказывает Алексей Чемерис, доктор биологических наук, профессор, сотрудник Института биохимии и генетики Уфимского ФИЦ РАН. — А ПЦР-анализ, который ему сделали в специальном медицинском центре наши коллеги-профессионалы, как только он почувствовал недомогание, — отрицательный. Видимо, в тот момент у больного было мало вирусных частиц в организме — за пределами чувствительности теста».
Ученые называют такие результаты ложнонегативными — инфекция проявляется внешне, а тест на возбудителя — «чистый». Тут дело и в самом методе, и в его массовом применении.
Когда медсестра берет мазок из ротоглотки и носоглотки, на кончике зонда остается немного влаги, а в ней — клетки эпителия. Зонд опускают в пластиковую пробирку с раствором (эппендорф) и кончик отламывают, чтобы закрыть емкость. В лаборатории ее помещают в центрифугу, проводят ряд манипуляций для выделения из клеток фрагментов вирусного генома. В случае с COVID-19 — это РНК коронавируса SARS-CoV-2.
В образовавшийся раствор добавляют праймеры — искусственные участки генома коронавируса, именно они опознают SARS-CoV-2, и один из них служит затравкой для синтеза цепочки ДНК под действием определенного фермента на основе механизма обратной транскрипции. Фактически получается ДНК-копия участка коронавируса, которую уже можно размножать. Для этого запускают ПЦР — полимеразную цепную реакцию. За несколько десятков циклов она увеличивает число копий ДНК, а специальный флуоресцентный краситель подсвечивает их в пробирке, сигнализируя о вирусе. Если в биоматериале нет вирусных частиц, ампликонов (продуктов ПЦР) не будет вовсе, результат — отрицательный. Если вируса очень мало, итоговое количество ампликонов по завершении ПЦР окажется за пределами чувствительности прибора и результат — ложноотрицательным.
Тонкости метода
В ПЦР-диагностике много нюансов, объясняет Алексей Чемерис. В лаборатории для научных целей выявляют даже единичные копии вирусного генома в образце, при массовом применении чувствительность обычно на порядки ниже.
«Из-за случайных мутаций генома праймеры могут не сработать, если однонуклеотидные замены или даже более значительные изменения генома вируса пришлись как раз на эти участки. Вероятность невысока, но она есть», — отмечает ученый.
Возможны сбои при ручных операциях, которых не так много. Одна из них — извлечение вирусной РНК из образца. Автоматический экстрактор нуклеиновых кислот стоит довольно дорого, поэтому обычно эту процедуру доверяют лаборанту. Редко, но ложноположительные результаты случаются, в том числе из-за особенностей ПЦР или загрязнения образца.
Чаще всего, однако, проблемы возникают до того, как пробирка попала в лабораторию. Вот что
пишут
авторы статьи в журнале «Вестник Росздравнадзора»: «В настоящее время имеются неопровержимые доказательства того, что преаналитическая фаза является основным источником ошибок в лабораторных исследованиях, когда они используются для диагностических или исследовательских целей». Они публикуют целый список нарушений, ведущих к ложноотрицательным результатам.
«Мы его не контролируем». Ученый — о странном поведении SARS-CoV-2
Ключевой этап — подготовка к исследованию. «За три часа до анализа нельзя есть, пить, курить и полоскать рот. Дело в том, что коронавирус поражает клетки слизистой оболочки дыхательных путей. Проникая в них, он начинает размножаться, накапливается на их поверхности. Но есть еще и эпителиальные клетки, которые часто обновляются. Вместе с водой, едой и избытком слюны при курении и жевании жвачки эпителиальные клетки попадают в пищевод. В результате вероятность обнаружить вирус в мазке падает практически до нуля», — комментирует Тамара Силкина, врач клинической лабораторной диагностики, директор по лабораторным технологиям «Гемотеста».
Не менее важна процедура взятия биоматериала. Если неверно выбрать точку для мазка, например, из-за кашля или рвотного рефлекса, на зонд может не попасть достаточное количество клеток. На результат также влияют нарушения технологии хранения, транспортировки образцов.
«Цена ошибки очень высока — процент выявляемости коронавирусной инфекции снизится, а скорость ее распространения вырастет. Люди, получившие ложноотрицательные результаты, будут чувствовать себя спокойно, выходить в общественные места и контактировать с окружающими», — уточняет представитель «Гемотеста».
О точности диагностики
В России одобрены к использованию десятки тест-систем для выявления коронавируса. Ключевые характеристики — диагностические специфичность (точность) и чувствительность. Первый параметр показывает способность набора определить конкретный вирус. Второй — возможность обнаружить его части, даже если в биоматериале их очень мало. «Чем эти параметры ближе к ста процентам, тем лучше», — подчеркивает Тамара Силкина.
«Порог чувствительности — общий как для российских, так и для зарубежных тестов: 10³ на миллилитр. То есть должно быть не менее тысячи вирусных геном-эквивалентов на миллилитр образца. «ДНК-технология» заявила о чувствительности 10¹ — десять вирусных единиц на миллилитр. Другой важный показатель — воспроизводимость, то есть возможность получить одинаковый результат в разных условиях. Нужно учитывать и сходимость — отсутствие существенных различий между измерениями, выполненными в одинаковых условиях», — добавляет медик.
Метод ПЦР с обратной транскрипцией хорошо отработан и практически полностью автоматизирован. С момента попадания в лабораторию анализ занимает четыре-шесть часов. В мире эти тесты буквально поставили на поток. Только в Москве, по официальным данным, сделали 12 миллионов анализов.
Медицинский работник берет мазок у пациентки в поликлинике № 28 в Волгограде
1 из 6
Для взятия мазков существуют универсальные наборы с длинным зондом. После взятия мазка зонд помещают в пробирку-эппендорф и герметично закрывают. ООО «Лаборатория Гемотест» в Тамбове
2 из 6
Медицинская сестра наклеивает индивидуальный штрихкод на пробирку с ПЦР-тестом на коронавирус COVID-19
3 из 6
Бокс приготовления реакционных смесей и проведения ПЦР (полимеразной цепной реакции). Микробиологическая лаборатория ФБУЗ » Центр гигиены и эпидемиологии в Краснодарском крае»
4 из 6
Станция для проведения ПЦР-тестов
5 из 6
Вход в ПЦР-бокс лаборатории ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Архангельской области»
6 из 6
Медицинский работник берет мазок у пациентки в поликлинике № 28 в Волгограде
1 из 6
Для взятия мазков существуют универсальные наборы с длинным зондом. После взятия мазка зонд помещают в пробирку-эппендорф и герметично закрывают. ООО «Лаборатория Гемотест» в Тамбове
2 из 6
Медицинская сестра наклеивает индивидуальный штрихкод на пробирку с ПЦР-тестом на коронавирус COVID-19
3 из 6
Бокс приготовления реакционных смесей и проведения ПЦР (полимеразной цепной реакции). Микробиологическая лаборатория ФБУЗ » Центр гигиены и эпидемиологии в Краснодарском крае»
4 из 6
Станция для проведения ПЦР-тестов
5 из 6
Вход в ПЦР-бокс лаборатории ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Архангельской области»
6 из 6
Поскольку этот метод прямо выявляет возбудителя в организме, его относят к доказательной медицине и рекомендуют учитывать в клинической практике. Однако анализ больших данных говорит, что при массовом использовании ПЦР-тесты часто промахиваются.
Ложнонегативные результаты получаются в 20-66 процентах случаев. Такие данные из литературы приводят исследователи из Сеченовского университета. Вместе с зарубежными коллегами они
изучили
записи пациентов, госпитализированных в университетскую клинику в апреле — мае. Из 3480 человек, чьи ПЦР-тесты были доступны, примерно половина оказались чистыми. В то же время клиническая картина и КТ легких указывали на коронавирусную инфекцию. Авторы допускают, что в реальной клинической практике ПЦР-анализ не столь и критичен.
«Этиологическая диагностика, которая выявляет причину заболевания, нужна априори, — не соглашается Айрат Мавзютов, заведующий кафедрой фундаментальной и прикладной микробиологии, профессор кафедры лабораторной диагностики Башкирского государственного медицинского университета, руководитель Исследовательского центра «Лаборатория». — При вирусных инфекциях других, сравнимых по чувствительности и специфичности (точности), методов, кроме ПЦР-тестирования, нет».
Важно понимать, объясняет профессор Мавзютов, что клинический диагноз опирается на субъективные данные — анамнез (опрос) и осмотр пациента. На их основании невозможно установить вирусную природу заболевания и тем более какой именно возбудитель его вызвал. Для этого проводятся лабораторные исследования. Получаемые при этом данные, продолжает ученый, намного объективнее, поскольку большинство современных методов лабораторных исследований автоматизировано. Соответственно, на результаты не повлияют случайные факторы: уровень подготовки специалистов, их настроение, «погода в доме» и так далее.
«Диагноз COVID-19 можно поставить, только когда в материале от больного обнаружили РНК вируса SARS CoV-2 методом ПЦР или же антигены этого вируса иммунохимическими методами. Не выявив следов вируса в организме, нельзя говорить о «ковидной» природе заболевания или летального исхода», — утверждает Айрат Мавзютов.
Он обращает внимание на еще один аспект. ПЦР-тест не отличает РНК вируса, способного к репродукции, то есть размножению, от обломков «нежизнеспособных» вирусных частиц. Он лишь позволяет понять, присутствует или нет РНК коронавируса в клетках.
«Пока инфицированные клетки не заменятся на новые, а на это уходит от двух до четырех недель, не исключены положительные результаты. При этом вирус может быть уже «мертвым», человек здоров и никому не опасен», — отмечает профессор. Для уточнения учитываются данные целого ряда дополнительных исследований, позволяющих на лабораторном уровне оценивать остроту воспалительного процесса или образование антител на стадии его завершения.
Раскрыт механизм проникновения коронавируса в мозг
Альтернатива ПЦР-диагностике
В любом случае нужно повышать чувствительность тест-систем на основе ПЦР, заключает Алексей Чемерис, а для этого нужны другие подходы. «Надо сделать так, чтобы ложнонегативных результатов было меньше, практически исключить их», — считает он.
В
обзоре
, подготовленном вместе с коллегами, профессор Чемерис рассматривает преимущества и недостатки ПЦР-диагностики и других методов амплификации — копировании РНК бетакоронавирусов, к которым относится SARS-CoV-2. Теоретически весьма перспективен метод петлевой амплификации — LAMP, где используют сразу шесть или восемь праймеров.
«С одной стороны, повышается специфичность: только когда все праймеры отожгутся (сработают, распознав РНК коронавируса. — Прим. ред.), начнется амплификация, с другой — вирус мутирует и шансы, что реакция не пойдет, увеличиваются, поскольку какие бы участки генома ни выбрать, все равно вероятность мутаций больше в восьми участках, чем в двух или трех (при использовании гибридизационного зонда), достаточных для ПЦР», — объясняет исследователь.
Во время предшествующей эпидемии SARS возбудителя выявляли с помощью реакции NASBA (амплификации на основе секвенирования нуклеиновых кислот) и RCA (репликации по типу катящегося кольца). Геномный редактор CRISPR-Cas также пробуют применять для идентификации РНК нового коронавируса. Есть работы по полногеномному секвенированию любого генетического материала, находящегося в биоматериале. Метод очень чувствительный, но дорогой и долгий — занимает 20 часов. Так что в ближайшее время ПЦР с обратной транскрипцией останется самым массовым способом обнаружения коронавируса в организме.
Назван самый ранний признак COVID-19, который легко пропустить
Екатерина Гергесова, высшая квалификационная категория, КМН, медицинский консультант онлайн-лаборатории Lab4U: По имеющимся на сегодняшний день данным, специфические антитела к белкам оболочки коронавируса SARS-CoV-2 появляются в срок от нескольких дней до 2 недель после появления первых симптомов заболевания. Тогда эти антитела можно идентифицировать в сыворотке крови. Однако иммунный статус каждого человека индивидуален и зависит от множества внешних и внутренних факторов. Способность к выработке выявляемых существующими наборами реагентов специфических антител у каждого человека разная, и не всегда инфекционный процесс приводит к появлению детектируемых антител. И наоборот, выявление каких-либо антител не всегда со 100 % уверенностью позволяет говорить о наличии специфического заболевания.
Все используемые на сегодняшний день в лабораториях наборы реагентов для выявления антител к белкам SARS-CoV-2 характеризуются высокой чувствительностью и специфичностью. Это гарантирует, что они «увидят» IgM и IgG при их наличии в сыворотке крови. Но иммунная система конкретного человека может и не произвести достаточного количества антител, поэтому не всегда результат такого исследования может соответствовать ожиданиям пациента.
Тесты ПЦР ошибаются более чем в половине случаев, поэтому опираться на них при диагностике коронавируса нельзя. К такому выводу пришли специалисты Сеченовского университета, которые совместно с коллегами из других стран провели масштабное исследование проблемы диагностики COVID-19 в России и изучили течение заболевания у двух групп пациентов. В выборку вошли 3,5 тыс. больных. У половины из них наличие вируса было подтверждено лабораторным тестом, у остальных же были отрицательные результаты, но специфические симптомы и состояние легких указывали на COVID-19. Ранее о низкой информативности тестов ПЦР заявляли специалисты Минздрава, но цифры, приведенные ими, были ниже: по сведениям министерства, ошибочно 30–40% таких анализов. В Роспотребнадзоре «Известиям» сообщили, что чаще всего причиной нарушения технологии взятия теста становится человеческий фактор.
Ложные надежды
ПЦР-метод, используемый для выявления РНК коронавируса, дает высокий процент ложноотрицательных результатов, что делает необходимым поиск альтернативных способов диагностики COVID-19. Поэтому при постановке диагноза следует прежде всего учитывать симптомы и характер поражения легких. Об этом свидетельствуют результаты исследования международной группы ученых, которое прошло под руководством специалистов Сеченовского университета. Соответствующая научная статья опубликована в журнале Clinical Infectious Diseases.
Ученые сравнили течение COVID-19 у двух групп пациентов — с положительным результатом теста и с характерными симптомами, но без лабораторного подтверждения инфекции. Авторы изучили истории болезни 3480 человек, поступивших в больницы Сеченовского университета в апреле и мае. У половины (1728 больных) наличие вируса было подтверждено лабораторным ПЦР, у остальных (1748) не было надежного результата (тест отрицателен или результаты не определены), но специфические признаки и состояние легких указывали на заражение коронавирусом.
Специалистов интересовали демографические и физические характеристики (пол, возраст, рост, вес), наличие у пациентов сопутствующих заболеваний и данные компьютерной томографии (КТ) — в частности, объем поражения легких и характерные для COVID-19 изменения по типу «матового стекла».
Фото: ИЗВЕСТИЯ/Зураб Джавахадзе
Чаще всего в больницы с COVID-19 попадали люди среднего и старшего возраста (45–66 лет). Большинство пациентов (76%) находились в состоянии средней степени тяжести. Почти у всех на момент поступления в больницу была высокая температура, у многих слабость и кашель, а КТ показывала значительные изменения тканей легких. Потеря обоняния, боль в горле и мышцах, лихорадка чаще встречались у тех, кто потом выздоровел и выписался, а одышка и спутанность сознания — у пациентов, которые в итоге не смогли справиться с болезнью.
Статистически значимых различий в симптомах пациентов, чей диагноз был выставлен по результатам теста ПЦР и на основе клинической картины, обнаружено не было, сообщил «Известиям» профессор кафедры педиатрии и детских инфекционных болезней Сеченовского университета, первый автор статьи Даниил Мунблит.
— Важность нашего исследования заключается еще и в том, что из России вышли прозрачные и качественные данные, демонстрирующие, что многие аспекты течения коронавирусной инфекции мало отличаются от того, что видят коллеги в других странах. Статистика в большинстве стран не учитывает людей, у которых COVID-19 не подтвержден лабораторно. Таким образом, можно предположить, что число людей, переболевших или умерших от COVID-19, существенно больше, — рассказал Даниил Мунблит.
Фото: ИЗВЕСТИЯ/Дмитрий Коротаев
Таким образом, заключают авторы работы, если альтернативного объяснения характерным симптомам нет, они являются достаточным основанием для постановки диагноза и выбора тактики лечения даже при отсутствии положительного теста ПЦР.
Наличие положительного теста не оказывает также статистически значимого влияния на течение заболевания и шансы выжить. Вероятность смертельного исхода оказалась выше у пациентов мужского пола и старшего возраста, а также у людей с болезнями почек или сердца, диабетом и деменцией.
Принять решение
Далеко не всегда есть необходимость ориентироваться на ПЦР-тесты. Гораздо важнее оценка клинической картины, сообщил «Известиям» профессор-исследователь Балтийского федерального университета имени Канта Андрей Продеус.
— Глобально эта статья важна в том, что впервые для России это было доказано клинически на большой выборке пациентов. Нужно понимать: если тест позитивен, это говорит о наличии патогена, но если он негативен, это не означает, что вируса в организме нет. Поэтому ориентироваться на клинические признаки, такие как одышка, температура и кашель, важнее, — пояснил он.
Фото: РИА Новости/Антон Вергун
Более того, во время пандемии вклад других заболеваний, вызывающих вирусную пневмонию и дающих картину «матового стекла» на КТ, весьма ограничен, сообщил в разговоре с «Известиями» директор научно-клинического центра прецизионной и регенеративной медицины Казанского федерального университета (вуза — участника проекта «5-100») Альберт Ризванов.
— Логично предположить, что большинство пациентов, независимо от результатов тестирования, но демонстрирующих типичную клиническую картину, страдают именно COVID-19. Поэтому результаты исследования вполне логичны, — подчеркнул специалист. — Безусловно, важно, что в России проводятся такие качественные широкомасштабные исследования, которые в целом очень полезны как для наших врачей, так и для зарубежных коллег.
Ранее главный внештатный пульмонолог Минздрава России Сергей Авдеев заявил СМИ, что примерно в 30–40% случаев тест на коронавирус может дать ложноотрицательный результат. По его словам, это не связано с качеством самих тестов. Он подчеркнул, что чувствительность и специфичность тест-систем не подвергается никакому сомнению, а проблема заключается в некачественном взятии биоматериалов.
Фото: ТАСС/Артем Геодакян
Что же касается новых полученных клинических данных, «Известия» направили запрос в Минздрав РФ с вопросом о том, будут ли они как-то приняты во внимание, однако получить ответ на момент публикации не удалось. В Роспотребнадзоре редакции сообщили, что причины ошибок тестов могут быть разные: наличие «похожего» по структуре, родственного возбудителя, слишком малое его количество и так далее.
— Нарушения при подготовке пациента чаще всего приводят к ложноотрицательным результатам. Например, при взятии мазка на коронавирус пациент должен не менее трех часов ничего не есть и не пить, не полоскать горло. При несоблюдении этих правил можно просто «смыть» вирус и результат будет отрицательным, — сообщили в ведомстве. — Нарушение технологии выполнения анализа встречается сейчас очень редко, чаще всего это «человеческий фактор»: случайно перепутали пробу, отвлеклись и ввели результат не в ту ячейку и т.д. Во всех лабораториях ведется специальный внутрилабораторный контроль качества, который позволяет выловить такие ошибки до выдачи результата.
В исследовании Сеченовского университета сказано, что полученные результаты аналогичны данным по США, где от 42 до 51,8% людей получают ложноотрицательный результат теста ПЦР. В целом же уровень таких результатов колеблется от 20 до 66% — в зависимости от давности появления симптомов, поэтому результаты должны быть интерпретированы с осторожностью.
Фото: ТАСС/Антон Новодережкин
Помимо российских ученых, в исследовании приняли участие сотрудники Имперского колледжа Лондона, Пизанского университета, Университета Отто фон Герике в Магдебурге и Оксфордского университета.
Методы диагностики коронавирусной инфекции во всем мире одинаковые. Преимущество определенного способа в разных странах зависит от наличия лабораторий и необходимых ресурсов. Несмотря на то, что ученые определили наиболее достоверный вариант обнаружения COVID-19, используются и другие виды исследований, у которых уровень погрешности больше.
Например, тесты на антитела в крови спустя 7 дней после появления первых симптомов заболевания показали инфицирование только у 30% зараженных, через 14 – у 70%, на третьей неделе – у более 90%.
Даже самый точный анализ на коронавирус должен подкрепляться общими методами. Благодаря им появляется возможность оценить состояние пораженного организма.
В каких случаях нужно делать тест
Записаться на тестирование
COVID-19 в Клинике La Salute
Механизм размножения вируса в организме человека нестандартный. Попадая в здоровую клетку, молекулы инфекции захватывают ее и заставляют производить вместо обычных белков собственные копии. В результате происходит поражение органов и развивается обширное воспаление.
Для пациентов из группы риска болезнь может обернуться летальным исходом. Например, в конце ноября 2020 года за сутки в мире из жизни ушло более 13 тысяч пациентов.
КОВИД-19 начинает свое движение с верхних дыхательных путей и горла, постепенно спускаясь в легкие. При тяжелой форме заболевания развивается пневмония, а симптомы, которые ощущает зараженный, схожи с ОРВИ.
Программы реабилитации после COVID-19
Необходимо незамедлительно обратиться ко врачу в случае проявления у взрослых следующих симптомов:
- высокая температура тела, которая держится несколько дней и не сбивается жаропонижающими;
- слабость и сильная утомляемость;
- одышка при малейшей физической активности или глубоком вдохе;
- ощущение боли и давления в области грудной клетки;
- снижение или потеря аппетита;
- тошнота, рвота;
- расстройство желудка (вместе с ним может болеть кишечник);
- приступы дрожи с ознобом;
- сухой кашель (или с небольшим количеством мокроты);
- помутнение сознания;
- насморк и першение в горле;
- кровохарканье;
- внезапная потеря или изменение вкуса и обоняния;
- боли в мышцах и костях.
Если есть подозрение на ковид-19, врач направляет пациента на анализы. Особенно важно вовремя проверяться на наличие инфекции людям из группы риска. К ним относятся лица, страдающие хроническими заболеваниями, нарушениями иммунной системы, беременные и младенцы. Также сюда входят пожилые старше 60 лет.
Также сдавать тест необходимо тем, кто:
- имел контакт с носителем;
- недавно совершал полет за границу.
Рекомендовано провериться на наличие коронавируса в организме всем, кто приехал из стран с неблагоприятной эпидемиологической обстановкой. Контактирование с носителями или теми, кто переболел ковидом ранее, является обязательным поводом сделать тест.
Записаться на тестирование
COVID-19 в Клинике La Salute
Общие методы диагностики коронавируса
При обращении пациента с жалобами на симптомы простуды или гриппа, врач оценивает признаки и решает, нужна ли госпитализация. Для того чтобы точно определить состояние больного, специалисту необходимо видеть всю картину.
Помимо проведения тестов на выявление коронавируса, желательно провести дополнительные обследования:
- ОАК – общий анализ крови. Проверяется концентрация лейкоцитов и тромбоцитов. Берется из пальца.
- Исследование уровня С-реактивного белка.
- Пульсоксиметрия.
- Биохимический анализ крови.
Вирус препятствует нормальному питанию кислородом всех органов. Они способны пострадать, даже если нет явных симптомов заражения. Общие анализы крови при коронавирусе помогают врачу назначить правильное лечение пациенту.
Специфические методы диагностики ковида
Диагностика, лечение, вакцинация COVID-19
Защитная система организма построена так, что, при попадании в него новой инфекции, происходит выработка антител. Это белки, которые призваны атаковать вирус. Диагностировать его наличие у человека можно разными методами. Например, путем обнаружения антител и РНК ковида. Ни один из существующих способов не отличается 100% надежностью, но некоторые имеют преимущества перед другими. Рассмотрим детально, какие специфические способы диагностики coronavirus используются в медицине.
Иммунохроматографический метод диагностики SARS-CoV-2
Он также называется латеральный проточный иммуноанализ. ЛПИА – быстрый способ выявления ковид-инфекции. Принцип работы основан на реакции в биоматериале между антителом и антигеном. К первым относятся иммунные клетки IgM и IgG, которые вырабатываются в организме после контакта с вирусом. Вторые – это белки, которые входят в состав COVID-19, и распознаются молекулами M и G.
Анализ проводится при помощи тест-полосок. В каждой используется несколько плотно прижатых одна к другой мембран. Они находятся в корпусе из пластика. Для проведения диагностики таким способом используется несколько видов биоматериала.
Экспресс-тестирование на определение антител в крови
Из вены пациента берется кровь. Ее капля помещается на полосу. Под действием капиллярной силы жидкость передвигается по всей длине теста, достигая меток из коллоидного золота.
Если происходит захват антител IgM и IgG, анализ показывает положительный результат. Тогда на нем образовываются полоски бордового цвета. Может быть несколько вариантов окрашивания.
Если оно происходит возле показателей:
- C, G и M – результат положительный. Обнаружены оба антитела, человек выздоравливает. Инфекция поздняя, а IgM еще не успели исчезнуть.
- C и G – выявлены иммуноглобулины класса G. Пациент уже выздоровел.
- C – результат отрицательный.
- C и M – обнаружены антитела IgM. Человек в данный момент болеет коронавирусом.
Программы реабилитации после COVID-19
Анализ показан даже бессимптомным носителям, у которых также вырабатываются антитела к коронавирусной инфекции.
Одновременная проверка наличия IgM и IgG необходима для:
- Ранней диагностики иммуноглобулинов M.
- Мониторинга всех стадий лечения.
- Выявления количества бессимптомных носителей вируса.
- Оценки доли переболевших.
- Правильного распределения нагрузки медицинских работников.
Сейчас в мире используются тест-системы высокого качества. Но их нельзя назвать полностью надежными. Во-первых, большое значение имеет время проведения анализа. Если проходит 3–6 суток после заражения, точность исследования составляет 30%, через две недели (и больше) после начала признаков заболевания – 90%.
Во-вторых, экспресс-тесты могут показывать ложноотрицательные результаты по нескольким физиологическим причинам:
- индивидуальный иммунный ответ по-разному производит антитела;
- спустя две недели выработанные IgM исчезают, а на их месте образуются иммуноглобулины класса G;
- невысокая концентрация молекул M и G. Уровень может быть ниже, чем предел обнаружения.
Наличие иммуноглобулинов G указывает на то, что пациент перенес ковидную инфекцию в прошлом, M – еще не выздоровел. Последний проявляется не только, когда болезнь протекает в тяжелой форме, но и когда нет никаких симптомов.
С помощью экспресс-теста на антитела можно проверить и ребенка. Хоть у детей часто нет признаков ковида, и до 10 лет они не способны заражать окружающих (по последним данным ученых из Швейцарии), вирус незаметно поражает организм, поэтому нужно вовремя обратиться к врачу.
Благодаря этому методу происходит значительная экономия времени. Определить наличие у человека антител SARS-CoV-2 можно без специального оборудования. Более того, процедура выполняется как в клинике, так и локально (дома, на вокзале, в аэропорту и т.п.).
Программы реабилитации после COVID-19
Записаться на тестирование
COVID-19 в Клинике La Salute
Количество антител в организме зависит от того, сколько вируса проникло в него. Например, если заразиться в автобусе, когда кто-то рядом стоящий чихнул, и от активно болеющего человека, находясь с ним в одной палате или комнате, доза инфекции в первом случае на порядок меньше.
Чем тяжелее заболевание у человека, тем у него выше уровень IgG. Эти антитела, произведенные иммунной системой, сохраняются в крови на больший промежуток времени, чем у тех, кто болеет бессимптомно или в легкой форме.
Несмотря на средний уровень надежности, стоит делать экспресс-тесты. Например, если у пациента с пневмонией оказался положительный результат, в 95% случаев можно утверждать наличие в его организме ковида.
Чтобы знать достоверно, заразен ли еще больной с выявленными иммуноглобулинами, следует сдать мазок со слизистой носоглотки и зева. До этого момента лучше соблюдать с таким человеком социальную дистанцию, если это возможно. Также стоит пользоваться средствами индивидуальной защиты.
Экспресс тест на выявление антигена в образцах мазков
На ранних сроках заболевания специалистом производится забор биоматериала из носоглотки и зева человека. Для этого используются несколько стерильных зондов, которыми совершаются вращательные движения. Процедура взятия мазков может принести легкий дискомфорт. Для образца из носа трубка вводится через перегородку на глубину 8–10 см.
Отобранный биоматериал опускается в раствор. Спустя несколько минут 3 капли полученного образца помещаются на тестовую кассету. Через некоторое время специалист оценивает результат. Чем интенсивнее окрашены линии в анализируемой зоне, тем выше концентрация определяемого антигена.
Программы реабилитации после COVID-19
Такой метод ЛПИА простой в проведении. Результат этого экспресс-тестирования легко определяется визуально и может быть:
- Положительным. Это означает, что инфекция обнаружена. В таком случае следует дополнительное исследование методом полимеразной цепной реакции. Повторно мазок для него брать нет необходимости.
- Отрицательным. Коронавирус не подтвердился у пациента на момент проведения анализа.
Это аналог ПЦР диагностики официально одобрен Минздравом РФ. Преимущество такого тестирования в том, что врач может его провести прямо на приеме. В среднем время готовности результата составляет 15–30 минут. Этот тест можно сделать в нашей клинике. Также возможен выезд на дом.
Тестирование методом ПЦР
Полимеразная цепная реакция – этот способ обнаружить коронавирус в организме путем многократного увеличения малых концентраций ДНК в пробе. Копируется только один участок, который подходит под заданные условия. Этот процесс получил название амплификация.
Сегодня метод ПЦР – один из самых чувствительных и точных в мире. За его изобретение американец Кэри Мюллис был награжден Нобелевской премией.
Проверять наличие инфекции при помощи PCR можно, даже когда в образце присутствуют только несколько молекул ДНК вируса. Врачи нашей клинике проводят такую диагностику. Записаться можно тут.
Тест необходимо сдавать утром натощак, не используя никакие спреи для ротовой полости, и до чистки зубов. Взятие мазка из носоглотки происходит в вирусной лаборатории больницы или клиники. Медики при помощи образца слизи в течение 24–72 часов определяют наличие РНК возбудителей болезни.
Несмотря на то что ПЦР анализ признан самым надежным во всем мире, тест может также показать ложный результат. Даже если он дважды отрицательный, ошибку исключать нельзя.
Ни одна из существующих систем диагностики не застрахована от человеческого фактора. Поэтому ложноотрицательный результат возникает вследствие:
- нарушения условий транспортировки биоматериала;
- несоблюдения технологии взятия образца;
- слишком раннего или позднего обращения пациента за диагностикой.
Вы можете пройти тестирование в домашних условиях, связавшись с сотрудниками нашей клиники по телефону. Мы организовываем выезд мобильной бригады по адресу и гарантируем безопасность забора и транспортировки материала для исследования.
При необходимости совершить процедуру бесконтактно, можно приобрести готовую тест-систему. Набор прост в использовании. С ним взять материал получается самостоятельно без посторонней помощи.
Причиной ложного результата могут быть и технические факторы. Например, существуют ингибиторы ПЦР, которые мешают накоплению копий нуклеиновых кислот. Даже когда есть достаточное количество повторений ДНК, избыточные соли, этанол, фенол и прочие соединения препятствуют правильной диагностике. Это наиболее частая причина получения ложного результата PCR.
Также метод не всегда срабатывает, когда появляются новые мутации коронавируса. По подсчетам российских ученых к осени 2020 года уже существовало 80 разных штаммов. Генетический код SARS-CoV-2 изменяется понемногу в каждом организме, но происходит это довольно медленно. Появляются новые копии вируса с незначительными отличиями, и отследить все существующие версии по миру невозможно.
Наиболее распространенными в России являются два штамма коронавируса, которые обнаруживаются при ПЦР в 99% случаев заражения:
- Европейский.
- Азиатский.
Темпы мутации более заметны, если проследить за началом пандемии. Штамм вируса L выявлен у жителей китайского Уханя в декабре 2019. Спустя год эта генетическая цепочка практически исчезла.
Известен уже не первый случай повторного заражения coronavirus. У пациента, переболевшего одним штаммом вируса, через некоторое время в организме обнаруживали новый. Поэтому целесообразно проведение нескольких тестов ПЦР, если проявляются симптомы заболевания.
Методы на основе микрочипов
Наука в этой сфере все еще продолжает развиваться. Постоянно проводятся исследования с целью быстро выявить наличие коронавируса в организме. Ученые из Санкт-Петербурга разработали биочип, который экспресс-методом справляется с этим заданием. Для анализа используются молекулы, взаимодополняющие шипообразные клетки вируса. Устройство с олигопептидами (остатками аминокислот, соединенными в цепь) «связывает» ковид-элементы и оперативно идентифицирует заражение.
Сам чип по размеру напоминает разделенный пополам вдоль коробок спичек. К поверхности его канала прикрепляется комплементарная молекула. По нему пропускается суспензия, содержащая биоматериал со слизистых носоглотки. Если в нем находится вирус, то площадка из распознавающих элементов захватывает ковидные клетки.
Метод возник по принципу работы человеческого организма. В защитной системе есть механизмы молекулярного распознавания. Основаны они на функциях антител. Но для диагностики коронавируса последние обходятся дорого, поэтому пептиды создаются искусственным путем. Такие молекулы довольно стойкие и могут долго храниться.
Записаться на тестирование
COVID-19 в Клинике La Salute
Преимущество использования микрочипа в том, что:
- Он выдает результат уже через 10 минут.
- Этот метод намного чувствительнее, чем иммунохроматографические. Можно получить истинный показатель даже при небольшой концентрации вируса в крови.
По мнению исследователей, олигопептиды, которые используются для обнаружения ковида, можно в будущем применять в составе лекарственных препаратов.
Петлевая изотермическая амплификация нуклеиновых кислот (LAMP)
Это новый перспективный метод диагностики коронавирусной инфекции, который только набирает обороты. В его основе лежит процесс создания дополнительных копий зараженных участков. Выявление РНК SARS-CoV-2 при помощи амплификации происходит в течение 15–20 минут. Этому способствуют постоянная температура реакционной смеси и производительные ферменты.
Для изотермальной ПЦР не требуется длительных циклов смены температур. Поэтому для получения результата времени уходит еще меньше, чем при других методах – 5 минут.
Петлевая изотермическая амплификация нуклеиновых кислот на данный момент активно используется в США. Весной 2020 года количество приборов для проведения LAMP здесь достигало 18 тыс.
Заявка на тестирование COVID-19
Перспективные методы диагностики COVID-19
В основе научных исследований, над которыми в данный момент проводится работа, находится процесс амплификации. По мнению ученых, можно не только обнаружить вирус с помощью специальных комплементарных молекул, но и разрушать его геном. Например, с этой целью могут быть запрограммированы отдельные ферменты (Cas13).
Какой тест на коронавирус самый точный и эффективный
В такой многогранной диагностике часто неясно, каким методом лучше узнавать, есть ли ковид в организме.
Понимая принципы и разницу в их работе, можно сделать правильный выбор:
- ПЦР – самый чувствительный.
- Быстрый анализ на антитела в крови – хороший в применении после выздоровления.
- Экспресс-тестирование на антиген в мазках – помогает выявить болезнь на ранних стадиях.
- ОАК, С-реактивный белок, биохимический анализ крови – показывают общее состояние здоровья при положительном результате на SARS-CoV-2.
Тестирование в клинике La Salute
Наиболее распространенные анализы на коронавирус – экспресс-тесты и ПЦР. Выбирать подходящий необходимо на основании имеющихся признаков заболевания, наличия или отсутствия контакта с носителем вируса. Краткое сравнение методов диагностики в таблице.
| Название теста | Точность | Когда делать | Преимущество |
|---|---|---|---|
| Экспресс-тестирование на антиген SARS-CoV-2 в образцах мазков из носоглотки и зева человека | 90% | С первых дней появления признаков заболевания. При подозрении на бессимптомное течение ковида | Результат готов через 15–30 минут, интуитивно понятный на уровне «да-нет» |
| Экспресс-тестирование на антитела IgM, IgG методом ИФа | 90% | Через 2 недели и больше после начала признаков заболевания. При подозрении на бессимптомное течение COVID-19. После того, как человек переболел | Определить наличие антител можно уже спустя 5 минут. Тест позволяет узнать стадию заболевания и уровень защитных сил организма |
| ПЦР | 99% | Начиная с первого дня после контакта с носителем вируса. При положительном результате экспресс-тестов | Достоверность и высокая чувствительность теста |
Диагностика, лечение, вакцинация COVID-19
Следует учитывать, что точность теста на ковид никогда не достигает 100%. Она зависит от человеческого и технологического факторов. Даже если пациент получил отрицательный результат, это не обозначает, что он не болеет. Важно то, в какой день сдан тест. Если все сделано правильно, можно узнать, наступило ли выздоровление. Это можно сделать с помощью анализа на антитела.
Вывод
Среди известных способов диагностики коронавирусной инфекции наибольшую эффективность показала полимеразная цепная реакция. Метод ПЦР назван учеными самым достоверным и чувствительным. РНК SARS-CoV-2 выявляется путем взятия мазка из ротоглотки. Применение такого анализа помогает поставить пациенту точный диагноз.
Эффективными в определении антител к ковиду показали себя также экспресс-тесты. Они удобны тем, что результат можно узнать через 5–30 минут после взятия проб. Список способов диагностики коронавируса скоро пополнится новыми методами, поскольку исследования продолжаются.
Записаться на тестирование
COVID-19 в Клинике La Salute
В Роспотребнадзоре объяснили ложноотрицательные ПЦР-тесты при COVID-19
Ложноотрицательный результат теста на коронавирус может происходить из-за того, что инфицированный человек сдает анализ на поздних стадиях болезни. Такое мнение выразили в Роспотребнадзоре. Там подчеркнули, что вырастает шанс получить такой результат у больного COVID-19 после четвертого-пятого дня болезни.
При заражении COVID-19 у больного отсутствуют специфические признаки, которые характерны только для этой инфекции. Наиболее часто заразившийся сталкивается с респираторными симптомами, что может говорить не только о коронавирусе, но и ряде других заболеваний, включая грипп и ОРВИ.
По этой причине единственным способом диагностики коронавируса остается ПЦР-тестирование. Впрочем, в довольно большой доле случаев они оказываются недостоверными, о чем еще год назад говорили специалисты Минздрава, указывая на то, что 30-40% тестов дают ложноотрицательный результат. В частности, тогда считалось, что в большей части случаев на это влияют ошибки при заборе материала и качество самого теста.
Тем не менее существует и другое обоснование. По словам заместителя директора по клинико-аналитической работе ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора профессора Натальи Пшеничной, на результате анализа сказывается период заболевания, в который заболевший сдает ПЦР-тест. На ранних стадиях болезни получить положительный результат значительно выше.
«После четвертого-пятого дня болезни вероятность обнаружить вирус в носоглотке снижается, а респираторные симптомы могут быть в это время в самом разгаре. Если проводить тестирование в эти сроки, то можно получить отрицательный результат», — приводит слова специалиста РИА «Новости».
Общую картину по тестированию на COVID-19 также дополняет тот факт, что среди новых заболевших появляются и вакцинированные люди, но они при этом выделяют вирус в меньшем количестве и не такое продолжительное время, констатировала замдиректора Московского научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии имени Г. Н. Габричевского Татьяна Руженцова.
Однако сомнительный или ложный результат может давать любая тестовая система. Эксперты неоднократно выражали мнение, что ложные результаты на коронавирус связаны связаны как с ошибками медработников, так и пациентов. Иными словами, речь идет о несоблюдении правил и рекомендаций по тестированию.
Еще одну версию выдвигал директор Института медицинской паразитологии, тропических и трансмиссивных заболеваний Сеченовского университета Александр Лукашев. Газете «Известия» он рассказывал, что COVID-19 — специфический вирус в том плане, что его можно не обнаружить в доступном биоматериале. Если другие коронавирусы размножаются в носоглотке и ротоглотке, где их можно легко найти, то SARS-CoV-2 у значительной части больных присутствует только в бронхах.
Согласно данным Всемирной организации здравоохранения, точность ПЦР-тестов на коронавирус, несмотря на их неоднозначную оценку, составляет 95%.
Вместе с этим в ВОЗ подчеркивают, что на результаты тестирования влияет очень много факторов. Это касается и процесса забора материала, и транспортировки, и хранения биоматериалов. Важно и то, правильно ли подготовлен пациент к сдаче анализа и проверена ли тест-система в конкретной лаборатории.
Ссылка на публикацию:
rambler.ru
Существует ли различие между частотой ложноотрицательных результатов теста у асимптомных пациентов (более низкая вирусная нагрузка) по сравнению с симптомными пациентами (более высокая вирусная нагрузка)?
Вероятнее всего большее число ложноотрицательных результатов отмечается у асимптомных пациентов с коронавирусной инфекцией. Однако на данный момент не было выполнено крупных исследований, оценивших различия между группами (в том числе, необходимо проанализировать сероконверсию и провести тесты ПЦР).
- Следует отметить, что бессимптомные пациенты могут выделять вирус в высоких титрах В настоящее время серологические лонгитюдные исследования находятся в процессе.
Исследования, выполненные в домах престарелых и круизных лайнерах показали, что значительное количество пациентов имели вирус, культивируемый за 6 дней до появления симптомов.
Позволяют ли доступные в настоящее время тесты различать SARS-CoV-2 и другие коронавирусы, которые могут быть похожими? Как это повлияет на точность и надежность теста?
- Доступные мультипанели тестов ПЦР на респираторные вирусы не определяют SARS-CoV-2. В настоящее время многие компании работают над тем, чтобы включить тест на новый коронавирус в уже имеющиеся панели тестов.
- Тест на ПЦР SARS-CoV-2 не позволяет определить наличие других коронавирусов (HCoV-OC43, HCoV-229E, HCoV-NL63 и HCoV-HKU1) или MERS-CoV.
- Нельзя сравнивать доступные в настоящее время тесты на коронавирус ввиду их различной чувствительности и специфичности. Более того, даже если тест имеет специфичность от 96% до 98%, если вероятность претеста COVID-19 составляет <5%, более вероятно, что результат будет ложноположительным, чем истинно положительным — и это одна из ключевых причин почему массовое серологическое тестирование не рекомендуется.
- Причинами ложноположительных результатов являются перекрестная реактивность с другими коронавирусами, образование антител из-за других механизмов или низкая точность теста.
Источник: Eugenia Yun. COVID Testing FAQ, From Reinfection to Persistent Positives. Medscape. June 10, 2020.
Эксперты предупреждают, что ПЦР-тест иногда не выявляет заражение новым штаммом коронавируса «Омикрон», даже при наличии у человека явных признаков заболевания. Причиной могут быть как неправильно взятый анализ, так и несоблюдение пациентом рекомендаций перед проведением тестирования. Рассказываем, каких правил следует придерживаться, чтобы не получить ложный результат.
Фото: Москва 24/Антон Великжанин
Неправильный анализ
Врач-инфекционист Евгений Тимаков пояснил, что заражение «Омикроном» может сопровождаться отрицательным ПЦР-тестом. При этом больной все равно остается опасным для окружающих, не подозревая о своем иммунном статусе. По мнению эксперта, при наличии у человека признаков заболевания и отрицательном тесте есть вероятность, что анализ был проведен неправильно.
«Может быть, у него был неправильно взят анализ: или не в тот день, или недостаточное количества материала. «Омикрон»-штамм очень быстро может уходить из носоглотки и не выявляться с помощью тестов», – подчеркнул Тимаков.
Специалист добавил, что тем, у кого не подтвердился коронавирус, но при этом имеется подозрительная симптоматика, следует сократить контакты с людьми. По словам врача, ограничения желательно соблюдать около семи дней, однако продолжительность таких мер варьируется и зависит от тяжести COVID-19.
При предыдущих штаммах от десяти дней до трех недель человек был заразен – в зависимости от тяжести состояния. А у детей из кишечника вирус в активной форме выделялся более месяца. На «Омикрон» я этих исследований еще не видел.
Евгений Тимаков
врач-инфекционист
Вместе с тем эксперт отметил, что заболевший «Омикроном» человек наиболее заразен для окружающих во время инкубационного периода инфекции. Активное вирусовыделение наблюдается у больного в первые два-три дня после инфицирования.
Фото: Москва 24/Юлия Иванко
Как избежать ложного результата?
Ложноотрицательный результат тестирования на COVID-19 во многом зависит от подготовки пациента к его сдаче. Об этом Москве 24 рассказал врач – иммунолог-аллерголог Андрей Продеус.
По словам эксперта, взятие мазков рекомендуется проводить не раньше чем через 3–4 часа после последнего приема пищи. «Если вы ели, пили, жевали жвачку, курили, полоскали горло или чистили зубы, то у вас может быть ложноотрицательный ПЦР-тест», – предупреждает он.
Дело в том, что для ПЦР-исследования важно получить мазок с достаточным количеством инфицированных клеток. Еда и вода способны снизить объем вируса на слизистой, в результате чего анализ может показать неправильный диагноз, подчеркнул специалист.
Самое оптимальное время для сдачи тестов – это утро. После того как человек проснулся, не почистив зубы и не позавтракав, он идет сдавать анализ. В этом случае большая вероятность получить качественный тест.
Андрей Продеус
врач – иммунолог-аллерголог
Второй важный пункт – это правильный забор материала. Врач должен брать анализ с задней стенки глотки и с поверхности носовой пазухи, поясняет Андрей Продеус. При качественном взятии мазка можно говорить о корректности полученного результата теста, считает иммунолог.
Однако, по мнению специалиста, ПЦР-тест не является «истиной в последней инстанции».
Как доктор, я считаю, что клинические проявления болезни значительно важнее позитивного или отрицательного ПЦР-теста. Лечить человека нужно, исходя из его клинической симптоматики.
Андрей Продеус
врач иммунолог-аллерголог
Вместе с тем эксперт добавил, что при наличии симптомов необходимо сперва обратиться к врачу, а только по его назначению сдавать тест.
«Задача грамотного доктора – назначить те объемы исследований, которые будут эффективны именно для данной ситуации. Для меня ПЦР-тест имеет смысл, если у человека есть клинические признаки проявления болезни. В таком случае я хочу найти патоген, которым он болен», – говорит Андрей Продеус.
Касательно самих ПЦР-тестов, которых к настоящему моменту зарегистрировано несколько десятков, принципиальных различий между ними, по мнению иммунолога, нет.
Фото: Москва 24/Юлия Иванко
Экспресс-тест или ПЦР?
Врач – аллерголог-иммунолог Владимир Болибок считает, что сегодня экспресс-тесты вызывают меньше доверия. По его мнению, они довольно часто дают ложноотрицательные результаты.
«В экспресс -тестах используются антитела, направленные против спайк-протеина коронавируса. Как мы знаем, «Омикрон» очень сильно мутировал по сравнению с исходным вирусом, поэтому те антитела, которые используются в некоторых тест-системах, могут пропускать этот спайк-протеин штамма, могут быть к нему не чувствительны», – заявил эксперт в беседе с Москвой 24.
При этом нельзя отменять и другие факторы, способные повлиять на результаты анализа, добавил он.
Если говорить со стороны пациента, то причина ложноотрицательного результата может быть в том, что человек смыл весь материал, нужный для анализа.
Владимир Болибок
врач иммунолог-аллерголог
При наличии симптомов заболевания лучше не ориентироваться на результат теста, полагает Владимир Болибок. По его словам, «сейчас свирепствует пандемия, вероятность, что человек заразился коронавирусом, – 99%».
Читайте также
- Терапевт назвал самые частые симптомы «Омикрона»
- Вирусолог спрогнозировал спад заболеваемости COVID-19 в РФ на следующей неделе
Альбика Халидова