Определение группы крови методы техника возможные ошибки

Регистрационные удостоверения

• 

• 

• 

• 

Определение группы крови по системе AB0 осуществляют в реакции прямой агглютинации с применением цоликлонов анти-A, анти-B, анти-AB, анти-A1 или стандартных гемагглютинирующих сывороток. Непрямой метод типирования основан на взаимодействии стандартных эритроцитов 0(I), A(II), B(III) с антителами α и β в анализируемой сыворотке. Перекрестный метод проводится в обязательном порядке как подтверждение выявления антигенов A и B цоликлонами. Первичное выявление антигена D системы Резус осуществляют с использованием цоликлона Анти-D-Супер (анти-D IgM). Уточняющее исследование, обнаружение частичных вариантов антигена D у доноров, производят с помощью цоликлона Анти-D (анти-D IgG). Материал об открытии групп крови систем AB0 и Резус, методики и техники типирования приведены в статье ниже.

В 1901 году выдающийся ученый Карл Ландштейнер открыл группы крови и заложил основы современной трансфузиологии. Исследователь выявил три группы на основании различных вариантов реакции агглютинации эритроцитов и сывороток крови. Материал для исследования был взят у сотрудников собственной лаборатории. Ученики Ландштейнера Декастелло и Стюрли несколькими годами позже открыли четвертую группу, но посчитали ее сомнительной и исключили из результатов исследований. В 1906 году психиатр из Праги Ян Янский подтвердил существование группы AB (IV). Публикация исследования в местном издании оказалась практически незамеченной. В 1910 году после повторного обнаружения четвертой группы Моссом  Ян Янский был вынужден доказывать первенство открытия. Чешский ученый предложил цифровое обозначение групп крови: I, II, III, IV.

В трансфузиологии группами крови называют различные сочетания антигенов эритроцитов. Антигены являются генетическими признаками: наследуются от родителей и остаются неизменными на протяжении жизни. В 1980 году Международное сообщество переливания крови разработало числовую терминологию для антигенов эритроцитов. Выделены 23 системы группы крови, включающие 194 антигена. Нумерация в большинстве случаев соответствует порядку обнаружения. Входящие в каждую из 23 систем антигены кодируются шестизначным номером: первые три цифры являются номером системы, оставшиеся три – указывают на специфичность антигена внутри системы.

Система группы крови AB0

Определение группы крови по системе AB0 основано на выявлении на поверхности эритроцитов человека группоспецифических антигенов 0, A, B и изоиммунных антител анти-A (α) и анти-B (β) в сыворотке. Уникальная особенность системы AB0 заключается в наличии в плазме человека естественных антител α и β к отсутствующему антигену. Возможны шесть вариантов аллельных антигенов: 00, A0, AA, B0, BB, AB. Фенотипически выделяют четыре группы: 0(I), A(II), B(III), AB(IV) — гетеро- и гомозиготные варианты объединяют (в России используют буквенно-цифровое обозначение).

Групповая принадлежность по системе AB0

• 0(I): антигены A и B отсутствуют, антитела α и β – обнаружены (35 — 40 % населения в мире);
• A(II): присутствует антиген A и антитела β (35 %);
• B(III): обнаружен агглютиноген B и агглютинин α (15 – 20 %);
• AB(IV): наличие агглютиногенов A и B, отсутствие агглютининов α и β (5 – 10 %).

По мере движения с запада на восток Евразии частота обнаружения антигена A падает, а антигена B возрастает. Антиген 0 редко встречается в Азии, но  имеет широкое распространение у коренных народов Южной Америки, Полинезии и Австралии. Причина – эпидемии инфекционных заболеваний.

Результат типирования крови записывают в историю болезни или в карту донора. Врач-трансфузиолог указывает дату и ставит подпись.

В отдельных случаях во время типирования наблюдается слабовыраженная агглютинация эритроцитов. Недостаточно выраженная реакция объясняется наличием слабых вариантов антигенов  A и B. Наибольшее клиническое значение представляют подгруппы A₁ и A₂. Впервые слабые варианты были обнаружены в 1911 году учеными Dungern и Hirszeld. Позднее в 1930 году Landsteiner и Levine предложили названия подгруппы – A₁ и A_2. A₂ встречается до 20 % в группе A и до 35 % в группе AB. Сыворотка лиц из образцов крови A₂ может содержать анти-A₁-антитела: в 2 % случаев в группе A₂ и в 30 % в A₂B. Антитела анти-A₁ представляют опасность ввиду агглютинации эритроцитов группы A.

Методика определения групп крови A₂ и A₂B

Частота выявления эритроцитов A₂ существенно варьируется в зависимости от применяемых реагентов. Приводим сравнение результатов исследования при использовании различных методик типирования групп крови A₂ и A₂B.

• Анти-A₁ (лектин, фитогемагглютинин). Диагностикум явно выраженно (на +++/++++) агглютинирует A₁ эритроциты сразу после смешения с образцом. Не агглютинирует A₂ или вызывает мелкую агглютинацию на пятой минуте и позднее.
• Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки.
• Цоликлоны анти-A и анти-AB.
• Цоликлон анти-A слабый.

Примечание: * — агглютинация выражена слабо, присутствуют мелкие агглютинаты на розовом фоне.

Наибольшую точность исследования обеспечивает Анти-A₁ (лектин, фитогемагглютинин). Тест рекомендован для выявления подгрупп антигена A у детей младше двух лет. Причина – физиологическая незрелость эритроцитов новорожденных, влекущая ошибочные результаты исследования со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками.

В 1930 году Landsteiner и Levine обнаружили подтип Aint: промежуточный вариант между A₁ и A₂. Данный антиген характерен для негроидов и достигает 8,5 % у лиц с группой крови A. У европеоидов Aint наблюдался лишь у 1 % людей со второй группой крови. В крайне редких случаях у человека отсутствуют все антигены системы AB0. Фенотип «Бомбей» обусловлен генотипом hh. При отсутствии антигена H у лиц данной категории обнаруживаются анти-A и анти-B антитела.

Методика определения групп крови

Типирование по системе AB0 осуществляют в реакции прямой агглютинации с использованием стандартных гемагглютинирующих сывороток или типирующих реагентов с моноклональными антителами. Применение цоликлонов предпочтительнее ввиду абсолютной специфичности: каждый реагент не содержит примеси других антител, балластных белков и инфекционных факторов.

Алгоритм выявления группы крови гемагглютинирующими сыворотоками

Для определения группы крови AB0 прямым методом используют две серии стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Подготовьте две серии сывороток трех групп с титром 1:32 или выше. Для забора каждой сыворотки используйте отдельную маркированную пипетку. Подготовьте сыворотку AB(IV) для контроля.

1. Обеспечьте хорошее освещение и температуру воздуха 18 – 25 °C.
2. Промаркируйте планшет: 0(I) – слева, A(II) – по центру, B(III) – справа. Вверху по центру укажите фамилию донора или номер анализируемой крови.
3. Нанесите в лунки 1 – 2 капли (приблизительно 0,1 мл) сывороток в два ряда в соответствии с маркировкой планшета.
4. Пипеткой или стеклянной палочкой поместите по одной маленькой капле исследуемых эритроцитов рядом с каплями сыворотки. Объем сыворотки должен примерно в 10 раз превышать объем эритроцитосодержащей жидкости.
5. Перемешайте капли в лунках палочкой.
6. Для ускорения реакции произведите легкое покачивание планшета.
7. Спустя три минуты в лунки планшета, в которых началась агглютинация, добавьте по одной капле NaCl. Подождите еще две минуты.
8. Спустя пять минут оцените результаты реакции в проходящем сете. В случае невыраженной агглютинации добавьте еще по одной капле NaCl.

Результаты реакции:

• Отрицательная реакция в трех лунках свидетельствует об отсутствии антигенов на эритроцитах исследуемого образца. Кровь относится к группе 0(I).
• Агглютинация в лунках с сыворотками 0(I) и B(III) говорит о наличии агглютиногена A и принадлежности к группе A(II).
• Наступление реакции с сыворотками 0(I) и A(II) свидетельствует о присутствии антигена B и групповой принадлежности B(III).
• Результаты реакции во всех лунках указывают на присутствие агглютиногенов A и B и соответствуют четвертой группе AB(IV).

В последнем случае следует удостовериться в отсутствии неспецифической реакции: нанесите на планшет 2 – 3 капли соответствующей группе AB(IV) сыворотки и добавьте одну каплю анализируемых эритроцитов. Перемешайте жидкости и оцените результат спустя пять минут. Отсутствие агглютинации свидетельствует о принадлежности к группе AB(IV), наличие – признак неспецифической реакции. В этом случае, а также при слабовыраженной агглютинации повторите исследование с другими сериями сывороток.

Техника определения группы крови цоликлонами

Моноклональные антитела к антигенам эритроцитов пришли на смену изогемагглютинирующих сывороток. Для каждого типирования достаточно одной серии реагентов анти-A, анти-B, анти-AB. Внедрение моноклональных реагентов позволило значительно упростить и стандартизировать методику типирования по системе AB0. Приводим краткое пошаговое руководство проведения исследования на планшете.

1. Обеспечьте хорошее освещение. Работайте при комнатной температуре воздуха.
2. Объект исследования – эритроцитосодержащие среды.
3. Промаркируйте лунки планшета: анти-A, анти-B, анти-AB или используйте планшет с маркированной наклейкой.
4. Нанесите примерно по 0,1 мл соответствующего моноклонального реагента в каждую из трех подписанных лунок.
5. Добавьте приблизительно по 0,03 мл анализируемых эритроцитов рядом с каждой каплей диагностикума.
6. Смешайте реагент с эритроцитами в лунках отдельными индивидуальными стеклянными палочками.
7. Покачивайте планшет около трех минут.
8. Проверьте наличие агглютинации в лунках.

Обычно реакция обнаруживается уже в первые секунды после смешивания. При этом слабые варианты антигенов A и B могут давать более позднюю агглютинацию.

Непрямой метод типирования: алгоритм действий

Методика определения основана на взаимодействии эритроцитов от предварительно типированных лиц групп 0, A, B или смеси эритроцитов от нескольких одногруппных доноров с изогемагглютининами α и β в исследуемой сыворотке.

При работе с каждым типирующим реагентом используйте сухие чистые пипетки. Промывание палочек для перемешивания и пипеток осуществляйте в 0,9 % растворе NaCl.

• Подготовьте пластину или планшет. Обеспечьте хорошее освещение помещения.
• Выполните забор 3 – 5 мл крови без стабилизатора в пробирку. Дайте сыворотке отстояться 1,5 – 2 часа при комнатной температуре.
• Отмойте тест-эритроциты в 0,9 % физиологическом растворе. Подготовьте 5 % взвесь.
• Промаркируйте секции на планшете: 0(I), A(II), B(III).
• Поместите по 2 капли (приблизительно 0,1 мл) анализируемой плазмы в каждую из трех лунок.
• Добавьте в лунки примерно по 0,03 мл тест-эритроцитов.
• Отдельными палочками смешайте типированные эритроциты с сывороткой.
• Аккуратно покачивайте планшет в течение 5 минут.
• Проведите визуальную оценку результатов реакции агглютинации в проходящем свете.

Заключение о групповой принадлежности

+ — наличие агглютинации, — — отрицательный результат реакции.

• 0(I): реакция в лунках A(II), B(III) (обнаружены антитела α и β).
• A(II): агглютинация с эритроцитами B(III) (выявлены агглютинины β).
• B(III): агглютинация в лунке A(II) (определены агглютинины α).
• AB(IV): отсутствие результатов реакции во всех лунках (антитела в плазме не обнаружены).

Система Резус

Levine и Stetson обнаружили антигены системы Резус в 1939 году. Ученые изучали причины развития гемолитических реакций у рожениц при трансфузиях женщинам идентичных по системам AB0, MN и P. эритроцитов мужей. Годом позже Landsteiner и Wiener продуцировали выработку антител посредством иммунизации кроликов эритроцитами обезьян макака-резус. Антитела получили название анти-RH антитела. Полученные агглютинины вступали в реакцию агглютинации с эритроцитами макак-резус и с эритроцитами 85 % граждан Нью-Йорка белой расы. Вызвавший образование антител антиген получил название RH-фактор (D-фактор).

Система Резус объединяет 45 антигенов. Агглютиногены передаются по наследству и остаются неизменными на протяжении жизни. Иммуногенность убывает в следующем порядке: D > c > E > C > e. Каждый агглютиноген кодируется одним из двух тесно связанных генов: RHD отвечает за выработку D-антигена, RHCE – за продукцию антигенов Cc и Ee. Резус-положительными донорами считают лиц с антигенами D, C или E на поверхности эритроцитов. При отсутствии вышеперечисленных агглютиногенов доноров считают резус-отрицательными.

В редких случаях эритроциты людей не содержат ни одного антигена резус. Фенотип обозначают Rh_null. Ген Xr_o в этом случае представлен в гомозиготной форме и подавляет продуцирование всех антигенов. Обладатели фенотипа Rh_null не проявляют агглютиногеной активности, но имеют возможность передавать антигены по наследству.

Среди европейцев частота резус-положительных по антигену D лиц составляет 85 %. На мембране красных кровяных телец обычно расположено около 10 000 – 30 000 молекул D. При этом существуют два особых типа D-положительных лиц: D^u (слабый) и D^partial (частичный). Иммунная система D^u и D^partial способна вырабатывать анти-D-антитела.

Слабый антиген встречается у 1,5 % резус-положительных лиц и характеризуется низким числом (100 – 500) молекул D на мембране. Является иммуногенным для резус-отрицательных лиц. При этом переливание D-положительных эритроцитов больным со слабым D может вызвать сенсибилизацию кровяных телец донора. Эритроциты с D^u слабо агглютинируются или совсем не вступают в прямую реакцию агглютинации с полными анти-резус антителами. Определение резус-принадлежности производят в непрямом антиглобулиновом тесте. Носителей D^u считают резус-положительными донорами и резус-отрицательными реципиентами.

Частичный D имеет дефицит одного или нескольких эпитопов белковой молекулы. Иммунная система людей с D^partial способна продуцировать антитела к недостающим эпитопам. Среди носителей частичного антигена выделяют семь групп лиц. Наибольшее клиническое значение имеет носительство D^VI (присутствует только эпитоп Z): обладатели данной категории продуцируют антитела к неизмененному антигену и к частичным антигенам D^I – D^V, D^VII. Техника выявления резус-фактора D^VI заключается в последовательном применении двух диагностикумов: моноклональных IgM анти-D-антител (цоликлона Анти-D-Супер или Анти-D IgM) и поликлональных или моноклональных IgG антител анти-D (стандартного универсального реагента или цоликлона Анти-D). Отрицательный результат реакции на первом и положительный результат на втором этапе исследования свидетельствует об обнаружении D^VI. Обычно категории D^VI соответствует генотип CcDee. Беременным женщинам с D^VI при вынашивании плода с полным D назначают антирезусный иммуноглобулин.

Антитела против антигенов резус являются иммунными. Возникают вследствие изосенсибилизации. Специфичность определяется спровоцировавшими образование антител антигенами. Выделяют полные и неполные антитела.

Полные являются IgM антителами. Отличаются большим молекулярным весом, обнаруживаются реже по сравнению с неполными антителами. Способны агглютинировать резус-положительные эритроциты. Имеют меньшее значение при трансфузиях.

Неполные преимущественно относятся к классу IgG. Закрепляются на поверхности резус-положительных эритроцитов без образования агглютинатов. Склеивание кровяных телец осуществляется при наличии коллоидных растворов и протеолитических ферментов или после обработки антиглобулиновой сывороткой. Обладают меньшим в сравнении с полными антителами молекулярным весом. Способны проходить через плаценту. Во время сенсибилизации сперва продуцируются полные антитела, далее в большей мере вырабатываются неполные (иммуноглобулины IgG) антитела.

Свыше 90 % осложнений при гемотрансфузиях обусловлено несовместимостью донора и реципиента по антигену Rho(D). Большое значение также имеет антиген hr’(c). Агглютиноген присутствует у 80 – 82 % населения. Оставшиеся 18 – 20 % лиц попадают в группу повышенного риска ввиду высокой вероятности несовместимости по hr’(c) с донорами и развития посттрансфузионных осложнений.

Техника выявления резус-фактора с использованием цоликлона Анти-D-Супер

Цоликлон Анти-D-Супер — это полные анти-D IgM антитела человека. Для получения достоверных результатов анализируемый образец должен содержать достаточное количество эритроцитов.

1. Обеспечьте хорошее освещение и комнатную температуру воздуха в помещении.
2. Поместите одну большую каплю (приблизительно 0,1 мл) Анти-D IgM на пластину.
3. Рядом расположите одну маленькую каплю (примерно 0,03 мл) исследуемых эритроцитов.
4. Перемешайте две капли стерильной палочкой.
5. Спустя 10 – 15 секунд плавно покачивайте пластинку на протяжении 20 – 30 секунд.
6. Проверьте наличие агглютинации спустя три минуты после перемешивания.

В случае наступления реакции кровь оценивается как резус-положительная (Rh+), при отсутствии реакции – как резус-отрицательная (Rh-). При отрицательной либо слабо выраженной агглютинации необходимо повторно провести исследование с неполными анти-D IgG антителами с целью выявления слабого или частичного антигена D.

Методика определения резус-фактора D^u в пробирочном тесте

Параллельно с анализом выполняют постановку трех контрольных проб: реагента цоликлон Анти-D (анти-D IgG) со стандартными резус-положительными и резус-отрицательными эритроцитами, анализируемых эритроцитов с раствором желатина без диагностикума анти-D IgG.

1. Поместите в пробирку 0,05 – 0,1 мл (одну каплю) эритроцитов из сгустка свернувшейся крови или отмытых от консерванта.
2. Добавьте 0,1 мл (две капли) подогретого до разжижения при 45 – 50 °C 10 % желатина.
3. Добавьте одну каплю цоликлона Анти-D (анти-D IgG).
4. Выполните перемешивание.
5. Инкубируйте пробирку на водяной бане 10 – 15 минут или в термостате при 48 °C на протяжении получаса.
6. Добавьте 5 – 6 мл изотонического раствора.
7. Переверните пробирку 1 – 2 раза.
8. Оцените наличие агглютинации в проходящем свете.

Отсутствие результатов реакции с анти-D IgM и выраженная агглютинация с анти-D IgG свидетельствуют об обнаружении слабых форм антигена D. При слабо выраженной агглютинации следует повторить исследование в непрямой пробе Кумбса.

Определение резус-принадлежности стандартным универсальным реагентом

Стандартный реагент антирезус Rh₀D содержит поликлональные неполные анти-D-антитела. Параллельно с анализом образца осуществляется контрольное исследование реагента Rh₀D со стандартными резус-положительными (одногруппными или группы 0) и резус-отрицательными (одногруппными) эритроцитами.

1. Поместите на дно пробирки одну каплю диагностикума Rh₀D.
2. Добавьте одну каплю анализируемых эритроцитов.
3. Несколько раз встряхните пробирку.
4. Наклоните пробирку практически до горизонтального положения и медленно поворачивайте не менее 3 минут. Растекание содержимого по стенкам обеспечит более выраженный результат реакции. Обычно агглютинация наступает в первые 60 секунд. Запас времени необходим для выявления слабого антигена D^u.
5. Добавьте 2 – 3 мл изотонического раствора NaCl и 2 – 3 раза переверните пробирку без взбалтывания.
6. Визуально оцените наличие агглютинации. Явно выраженные хлопья на фоне прозрачного раствора свидетельствуют о наличии антигена D. Равномерно окрашенная жидкость говорит об отсутствии антигена.

Результат считается достоверным только после проверки контрольных образцов: наступлении реакции со стандартными резус-положительными и отсутствии реакции – с резус-отрицательными эритроцитами.

Информацию о пошаговой постановке непрямого теста Кумбса с использованием неполных анти-D-антител читайте в разделе сайта «Реакция Кумбса».

Список литературы

• Рагимов, А.А. Трансфузионная иммунология/А.А. Рагимов, Н.Г. Дашкова. — М.: Медицинское информационное агентство, 2004. — 279 с.
• Шевченко, Ю.Л. Безопасное переливание крови/Ю.Л. Шевченко, Е.Б. Жибурт. — СПб.: Питер, 2000. — 308 с.

Патенты

• 

• 

• 

29
Методы определения групп крови и
резус-фактора. Профилактика возможных
ошибок

Определение
групп крови с помощью стандартных
сывороток. В
лунки планшета для определения групп
крови последовательно наносят пипетками
по одной крупной капле стандартной
сыворотки групп 0(1), А(П), В(Ш) двух различных
серий каждой группы. Затем наносят в
каждую лупку по капле исследуемой крови,
в 5 — 10 раз меньшую сыворотки. Сухими
стеклянными палочками или путем
покачивания планшета смешивают
стандартные сыворотки и исследуемую
кровь. Через 5 минут оценивают результат
(табл. 2).

Таблица
2

Определение
групп крови с помощью стандартных
сывороток

Группа исследуемой крови	Стандартные сыворотки
	0(I)	А(II)	В (III)
0(I)	—	—	—
А(II)	+	—	+
В(III)	+	+	—
AB(IV)	+	+	+

Определение
групп крови по стандартным эритроцитам.
В
лунки планшета наносят большие капли
плазмы исследуемой крови. Рядом с каждой
каплей плазмы последовательно наносят
по небольшой капле стандартных эритроцитов
групп 0(1), А(II), В(III).
Капли перемешивают покачиванием
планшета. Через 5 минут к каждой капле
смеси добавляют по 1 капле физиологического
раствора и учитывают результат.

Таблица
3

Определение
групп крови с помощью стандартных
эритроцитов

Группа исследуемой крови	Стандартные эритроциты
	0(I)	А(II)	В (III)
0(I)	—	+	+
А(II)	—	—	+
В(III)	—	+	—
AB(IV)	—	—	—

Определение
резус-фактора. На
дно сухой пробирки наносят 1
большую каплю универсального реагента
анти-резус, затем добавляют
такую же каплю исследуемой крови. После
встряхивания пробирки
производят перемешивание сыворотки
анти-резус и крови в течение
5 минут по стенкам пробирки, после чего
добавляют 5 — 7 мл физиологического
раствора. Наличие агглютинации
свидетельствует о
присутствии резус-фактора.

Определение
групп крови с помощью цоликлонов.
Цоликлоны
анти-А,
анти-В и анти-АВ предназначены для
определения групп крови
человека системы АВО в прямых реакциях
гемагглютинации и применяются
взамен или параллельно с поликлональными
иммунными сыворотками.

Моноклональные
анти-А и анти-В антитела продуцируются
двумя
мышиными гибридомами и принадлежат к
иммуноглобулинам класса
М. Цоликлоны изготовляются из асцитной
жидкости мышей-носителей
анти-А и анти-В гибридом. Цоликлон анти-АВ
представляет
собой смесь моноклональных анти-А и
анти-В антител.

Цоликлоны
выпускаются в жидкой форме во флаконах
объемом 5
— 10 мл. Цоликлон анти-А — желтого цвета,
анти-В — синего, анти-АВ
— бесцветный. В качестве консерванта
применяется азид натрия.

Техника
определения групп крови. Определение
производится в нативной
крови, взятой в консервант; в крови,
взятой без консерванта, в
том числе из пальца. Используется метод
прямой гемагглютинации на пластине или
планшете, определение производится в
помещении с хорошим
освещением при температуре 15 — 25 X.

1. Наносят
   на пластину или планшет индивидуальными
   пипетками цоликлоны анти-А, анти-В и
   анти-АВ по одной большой капле (0,1 мл)
   под соответствующими надписями.

2. Рядом
   с каплями антител наносят по одной
   маленькой капле исследуемой крови
   (0,01 — 0,03 мл).

3. Смешивают
   кровь с реагентом, покачивая планшет.

4. Наблюдают
   за ходом реакции с цоликлонами визуально
   при легком покачивании планшета в
   течение 3 минут. Агглютинация эритроцитов
   с цоликлонами обычно наступает в первые
   3 — 5 секунд, но наблюдение следует вести
   3 минуты ввиду более позднего появления
   агглютинации с эритроцитами, содержащими
   слабые разновидности антигенов А или
   В.

5. Результат
   реакции в каждой капле может быть
   положительным или отрицательным.
   Положительный результат выражается в
   агглютинации (склеивании) эритроцитов.
   Агтлютинаты видны в виде мелких красных
   агретатов, быстро смешивающихся в
   крупные хлопья. При отрицательной
   реакции капля остается равномерно
   окрашенной в красный цвет, агглютинаты
   в ней не обнаруживаются.

6. Интерпретация
   результатов реакции агглютинации с
   цоликлонами представлена в табл. 4.

Таблица
4

Определение
групп крови с помощью цоликлонов

Группа исследуемой крови	Стандартные эритроциты
	Анти-А	Анти-В	Анти-АВ
0(I)	_	_	—
А(II)	+	—	+
В(III)	—	+	+
АВ(IV)	+	+	+

Примечание:
знаком
(+) обозначено наличие агглютинации,
знаком (-) — се
отсутствие

При
положительном результате реакции
агглютинации со всеми гремя цоликлонами
необходимо исключить спонтанную
неспецифическую аглютинацию исследуемых
эритроцитов. Для этого смешивают на
плоскости 1 каплю исследуемых эритроцитов
с каплей физиологического раствора.
Кровь можно отнести к группе AB(IV)
только при отсутствии агглютинации
эритроцитов в физиологическом растворе.

Определение
резус-фактора с помощью цоликлона. В
лупку планшета наносят 1 большую каплю
цоликлона анти-Д-супер_т
рядом наносят 1 маленькую каплю исследуемой
крови.

Покачивая
планшет, смешивают кровь с цоликлоном.
За ходом реакции наблюдают в течение 3
минут. Наличие агглютинации свидетельствует
о присутствии резус-фактора.

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]

• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #

  11.02.2015127.49 Кб103.doc

• #

Каждая ампула стандартной сыворотки должна иметь паспорт-этикетку с указанием группы крови, номера серии, титра, срока годности, места изготовления. Ампулой з этикетки пользоваться запрещается. Стандартные сыворотки для определения группы крови по системе АВО выпускают с определенной цветовой маркировкой: I(0) — бесцветная, II(А)—голубая, III(В) — красная, IV(АВ) — желтая. Соответствующая цветовая маркировка имеется на этикетке в виде цветных полос: на этикетке сыворотки I(0) полос нет, сыворотки II(А)—две полосы синего цвета, сыворотки III(В)—три полосы красного цвета и сыворотки IV(АВ) — четыре полосы желтого цвета. Сыворотки хранятся при температуре +4 — + 10°С. Сыворотка должна быть светлой и прозрачной, ампула сохранной. Наличие хлопьев, осадка, помутнение являются признаками непригодности сыворотки. Титр сыворотки должен быть не менее 1:32, а активность — высокой: первые признаки агглютинации должны появляться не позднее 30 с. Сыворотки с просроченными сроками хранения к использованию не пригодны.

Тарелку делят цветным карандашом на 4 квадрата и в направлении по часовой стрелке обозначают квадраты I(0), II(А), III(В). В соответствующий квадрат тарелки пипеткой наносят крупную каплю сыворотки двух серий I(0), II(А), III(В) групп. Подушечку пальца обрабатывают спиртом и делают прокол кожи иглой-копьем. Первую каплю крови снимают марлевым шариком, последующие разными уголками предметного стекла вносят последовательно в капли сыворотки и тщательно размешивают. Капля вносимой крови должна быть в 5—10 раз меньше капли сыворотки. Затем путем покачивания тарелки тщательно перемешивают кровь с сывороткой. Предварительные результаты оценивают через 3 мин, после чего добавляют каплю изотонического раствора хлорида натрия, вновь смешивают путем покачивания тарелки и через 5 мин проводят окончательную оценку реакции агглютинации.

При положительной реакции изогемагглютинации хлопья и зернышки из склеившихся эритроцитов не расходятся при добавлении изотонического раствора хлорида натрия и перемешивании. При отрицательной реакции капли сыворотки на тарелке прозрачные, равномерно розового цвета, не содержат хлопьев и зерен. Возможны следующие 4 комбинации реакций агглютинации со стандартными сыворотками I(0), II(А), III(В) групп:

Определение групп кови

1. Все три сыворотки в обеих сериях не дают агглютинации. Исследуемая кровь I(0) группы.

2. Реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой II(А) группы обеих серий и положительная с сыворотками I(0) и III(В) групп. Исследуемая кровь II(А) группы.

3. Реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой III(В) группы в обеих сериях и положительная с сывороткой I(0) и II(А) групп. Исследуемая кровь III(В) группы.

4. Сыворотки I(0), II(А), III(В) групп дают положительную реакцию в обеих сериях. Кровь принадлежит 1У(АВ) группе. Но, прежде чем дать такое заключение, необходимо провести реакцию изогемагглютинации со стандартной сывороткой IV(АВ) группы по той же методике. Отрицательная реакция изогемагглютинации позволяет окончательно отнести исследуемую кровь к IV(АВ) группе. Выявление других комбинаций говорит о неправильном определении групповой принадлежности крови больного.

Сведения о группе крови больного вносят в историю болезни, делают соответствующую отметку на титульном листе за подписью врача, проводившего исследование, с указанием даты исследования.

Ошибки при определении групповой принадлежности крови возможны в ситуациях, когда при фактическом наличии агглютинации она не выявляется или выявляется агглютинация при ее фактическом отсутствии.

Невыявленная агглютинация может быть обусловлена: 1) слабой активностью стандартной сыворотки или низкой агглютинабельностью эритроцитов; 2) избыточным количеством исследуемой крови, добавляемой к стандартной сыворотке; 3) замедленной реакцией агглютинации при высокой температуре окружающей среды.

Чтобы избежать ошибок, необходимо использовать активные, с достаточно высоким титром сыворотки при соотношении объема исследуемой крови и стандартной сыворотки 1:5, 1:10. Исследование проводят при температуре не выше 25 °С, оценивать результаты следует не ранее чем через 5 мин от начала исследования.

Выявление агглютинации при ее фактическом отсутствии может быть обусловлено подсыханием капли сыворотки и образованием «монетных» столбиков эритроцитов или проявлением холодовой агглютинации при проведении исследования при температуре окружающей среды ниже 15 °С. Добавление капли изотонического раствора хлорида натрия к исследуемой крови и сыворотке и проведение исследований при температуре выше 15 °С позволяют избежать указанных ошибок. Ошибки в определении группы крови всегда связаны с нарушением методики исследования, поэтому необходимо тщательное соблюдение всех правил исследования.

Во всех сомнительных случаях необходимо произвести повторное исследование групповой принадлежности со стандартными сыворотками других серий или с помощью стандартных эритроцитов.

Библиографическое описание:

Тактаева, Е. В. Группа крови человека и проблемы при ее определении / Е. В. Тактаева. — Текст : непосредственный // Молодой ученый. — 2019. — № 2 (240). — С. 64-66. — URL: https://moluch.ru/archive/240/55598/ (дата обращения: 24.06.2023).



Группа крови — это генетически наследуемые признаки, не меняются в течение жизни в естественных условиях и описание индивидуальных антигенных характеристик эритроцитов, которые определяют с помощью методов идентификации специфических групп углеводов и белков, помещенных в мембраны эритроцитов человека или животного. Группа крови также характеризует системы эритроцитарных антигенов, или агглютиногенов (веществ, которые организм человека рассматривает как чужеродные, потенциально опасные, против которых начинает производить собственные антитела, см. агглютиноген), которые контролируются определенными локусами (конкретный участок в хромосоме), содержащие различное количество аллельных (варианты последовательности нуклеотидов ДНК в локусе) генов, таких, например., как A, B и 0 системе AB0. Наличие у людей разных Группа крови обусловлена ​​генетическими факторами, которые содержатся в длинном плече 9-й хромосомы.

К началу 20-го века никто и не подозревал, что кровь может быть разной. Переворот в этой области знаний сделал австрийский врач Карл Ландштейнер, который обнаружил и исследовал три антигены А, В и С. В 1901 году он поставил необычный эксперимент: он принимал сыворотки крови одних людей и смешивал с эритроцитами других, а именно взяв кровь себе и пяти своих сотрудников, отделив сыворотку от эритроцитов с помощью центрифуги и смешал отдельные образцы эритроцитов с сывороткой крови разных лиц и собственной. Некоторые сыворотки склеивали эритроциты, а некоторые — нет. И в зависимости от наличия или отсутствия этой реакции (агглютинации) были обнаружены группы крови.

В совместной работе с Л. Янским по наличию или отсутствию агглютинации Ландштейнер разделил все образцы крови на три группы: А, В и 0. Два года спустя ученики Ландштейнера, А. Штурли и А. Декастелло, открыли четвертую группу крови — АВ. Общепринятым является буквенно-цифровое обозначение Группы крови: первая — 0 (I), вторая группа — А (II), третья группа — В (iii), четвертая группа — АВ (IV). В среднеевропейской популяции по системе AB0 около 43 % людей имеют первую группу крови, 42 % — вторую, 11 % — третьего и около 4 % — четвертую. Группа крови по системе АВ0 отличают по наличию антигенов (агглютиногенов) на эритроцитах и ​​антител (агглютининов) в сыворотке крови (табл. 1).

Эритроцит может обладать только антигеном А (II группа крови), только антигеном В (III группы крови) или и А, и В одновременно (IV группа крови). Если же на поверхности эритроцитов нет ни одного из этих антигенов, значит, он относится к клеткам I (0) группы крови.

Кровь всегда готова к тому, что у нее могут попасть посторонние эритроциты. Если у человека есть антиген А (II группа крови), то в плазме обязательно присутствуют антитела бета. Как только в организм попадает эритроцит, что несет на себе антиген В, антитела тут же прилепятся чужака, как метка. Это передаст иммунной системе сигнал об опасности. У обладателей антигена В (III группы крови) функцию антитела играют альфа распознают эритроциты с А-антигеном.

Таблица 1

Основные факторы, обусловливающие групповую принадлежность крови по системе АВ0

Группа крови	Антигены (агглютиногены)	Антитела (агглютинины)
І	0	α та β
ІІ	А	β
ІІІ	В	α
ІV	АВ	Отсутствуют

Антигены системы АВО развиваются на эритроцитах еще до рождения ребенка. Например, антиген А находится на эритроцитах 37 дневного плода. Но полное развитие антиген получает после рождения, через несколько месяцев. У взрослых людей кроме антигенов А, В еще имеется антиген Н. Он предшественник антигенов А, В, но может быть и на поверхности эритроцитов первой группы.

В 1911 г обнаружены две подгруппы антигена А, а именно А1 и А2. Между собой они могут отличаться как качественно, так и количественно. Качественно — это особенности в биохимической структуре сахаров. А количественно — это большее количество детерминант в антигене А1. Поэтому факту определены подгруппы А2 и А2В.

Распознать А2 подгруппу можно по сильной активности взаимодействия анти-Н с А2 клетками чем с А1.

Для клинической практики наибольшее значение имеют две классификации Группа крови человека: система AB0 и резус-система (Rhesus) — вследствие того, что эти системы обладают наибольшей антигенной силой. При каждом переливании крови от человека к человеку обязательно учитывают совместимость именно с этими двумя системами, поскольку в случае переливания человеку другой (несовместимой) группы крови происходит агглютинация (склеивание) и гемолиз (разрушение) эритроцитов, что может привести смерти.

Наследование различных групп крови АВО-системы определяется различным сочетанием трех аллелей одной аллеломорфных группы генов, которые обозначаются как JA, β и I ‘и расположены в девять паре хромосом.

Аллель JA определяет образование антигена А на поверхности эритроцитов и агглютинина β в плазме крови, аллель JB — образование антигена В на эритроцитах и агглютинина α в плазме и, в конце концов, за аллеля J отсутствуют антигены А, В на поверхности эритроцитов и содержатся агглютинины α и β в плазме.

Генетические исследования показали, что в этой системе существуют следующие соотношения между генотипом и его фенотипическим проявлением:

‒ генотипы JAJA и JAJ0 дают одинаковый фенотип А с антигеном А и агглютининов β;

‒ генотипы JBJB и JBJ ° обусловливают одинаковый фенотип В с антигеном В и агглютининов α;

‒ генотип JAJB определяет фенотип АВ с антигенами А и В, но без агглютининов α и β;

‒ генотип J ° J ° вызывает фенотип 0 без антигенов А и В, но с агглютининами α и β.

Гены JA и JB в отношении гена J ° ведут себя доминантно.

Группы крови человека можно определить стандартными эритроцитами, цоликлонами (моноклональные антитела) как на плоскости, так и гелевыми технологиями. При определении могут возникнуть ошибки. Технические (например, неправильная маркировка крови и реагентов, неправильное соотношение, срок годности и т. д.), невысокое качество реактивов. Но самое важное это ошибки, обусловленные индивидуальными особенностями антигенов эритроцитов АВО. Поскольку антигены имеют сложную химическую структуру — гликолипиды, гликопротеины, гликозидные остатки, прикрепленные к олигосахаридным цепочкам. Даже сами олигосахаридные цепочки различны у антигенов А и В. Поэтому важно применять широкий спектр антител для определения антигенов. Количество детерминант на эритроцитах различное. При большом их количестве реакция агглютинации сильнее. Окружающая среда может влиять на модификацию антигенов. Детерминанты ослабевают или утрачиваются у онкологически больных людей, лейкозами. Эти изменения мало изучены. Они играют роль в нарушении синтеза трансфераз, ответственных за формирование антигенных детерминант А и В. Так же изменения имеют место при вирусной и бактериальной природе. При таких случаях возможно приобретение, например, В -подобного антигена. Он образуется вследствие влияния микроорганизмов взамен антигена А на мембране эритроцитов. Микроорганизмы выделяют ацетилазы, которые воздействуют на антиген А и последний становится похожим на антиген В. И что интересно, приобретенный антиген В не агглютинирует собственными анти-В антителами. Часто ошибки происходят при не выявлении антигена А2 в группе крови А или в группе крови А2В. Существуют ошибки, связанные со специфической и неспецифической агглютинацией. Это может связано наличием аутоантител как на эритроцитах, так и в сыворотке аллоантител.

Литература:

1. Лавряшина М. Б., Толочко Т. А., Волков А. Н. Аллоантигены крови человека: Учеб. пособ. — Кемерово, 2006; Практическая трансфузиология / Под ред. Г. И. Козинке. — М., 2005.
2. Википедия — статья «Группа крови».
3. Минеева Н. В. Группы крови человека. Основы иммуногематологии. Санкт-Петербург 2010 г. Издание 2-е.

Выводы:

У детей вакцинированных эпидемическим паротитом по индивидуальному плану наблюдается вторичная иммунологическая недостаточность с угнетением клеточного звена и поликлональной активацией гуморального звена иммунитета.

Изучение иммунного статуса у детей, получавших вакцинацию по индивидуальному плану диктует необходимость разработки эффективных методов оздоровления с включением в комплекс лечения имунокоррегирующей терапии.

Список литературы

1. Зверевв В., Юминова Н.В. Эффективность вакцинации против кори и эпидемического паротита, Инф. бюл. Вакцинация 2000; 11 (5):10-1.

2. Назиров Ф.Г. Состояние и перспективы развития педиатрической службы в свете реализации государственных программ реформирования здравоохранения и «Здоровое поколение». Журн. Педиатрия №2-3. -2000. С. 8-11.

3. Семенов Б.Ф., Баранов А.А. Вакцинопрофилактика при нарушениях здоровья. М.Мсоюз педиатров России. 2001.

4. Флетчер Р., Флетчер С., Вангер Э. Клиническая эпидемиология (основы доказательной медицины), М., Медиа Сфера, 1998; 345.

5. ЯрцевМ.Н., ЯковлеваК.П. Физиология и патология иммунной системы. 2004; 2: 11-9.

6. Toscani L., et al: Comparison of the efficacy of various mumps vaccine strains: Buckley R.H. J Allergy ClinImmunol 2002; 109: 747-57.

ПРИЧИНЫ ОШИБОК ПРИ ИССЛЕДОВАНИИ ГРУППОВОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ КРОВИ И МЕРЫ ИХ ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ

Лунина Г.В.

Лунина Галина Владимировна — врач, клиническая лаборатория диагностики, Отдел контроля качества и клинической лабораторной диагностики, Центр крови Белгородской области г. Белгород ОЗК №3, г. Губкин

Ошибки при определении группы крови, возникают при нарушении техники выполнения исследования или в случае трудноопределимых групп крови.

1. Технические ошибки:

• ошибочный порядок расположения реагентов;

• использование сывороток с истёкшем сроком годности;

• использование инфицированных сывороток;

• использование сывороток с титром ниже 32;

• использование одной палочки при смешивании сывороток разных групп и крови;

• нарушение соотношения между стандартными сыворотками и исследуемых эритроцитов (эритроцитов должно быть в 5-10 раз меньше, чем сыворотки);

• нарушение соотношений между эритроцитами и моноклональными реагентами (цоликлоны) (2-3:10)

• не соблюдение температурного режима (не ниже 15°С и не выше 25°С);

• преждевременная оценка результатов (ранее 5 минут);

• за агглютинацию принимают монетные столбики, если не добавляется 0,9% раствор хлорида натрия;

• недостаточно высокое качество используемых для исследования реагентов.

2. Ошибки биологического характера:

• способность эритроцитов давать агглютинацию со всеми стандартными сыворотками;

• у людей с заболеванием крови, печени, почек, хроническими процессами возможен процесс агглютинации эритроцитов с собственной сывороткой (для исключения ошибки тарелку поставить в термостат при 37°С на 5-6 минут);

• полная панагглютинация- необходимо исследовать агглютинины А и В в слюне;

• феномен Томпсона — инфицированная кровь даёт неспецифическую агглютинацию;

• у новорожденных агглютиногены А и В не достаточно активны и поэтому исследования должны проводиться с сыворотками с высоким титром антител;

• слабые агглютиногены А2, А3;

3. Трудноопределяемые группы крови.

Антиген А нельзя считать однородным, существует два основных его подтипа: А! и А2. Эритроциты с подтипом агглютиногена А! встречают намного чаще, чем с подтипом А2 (88% и 12% соответственно). В соответствии с этим группа А(П) имеет две подгруппы: А(П) и А2(П), а группа АВ(1У) — АВ(1У) и А2В(1У) (Таблица 1.).

Таблица 1. Трудноопределяемые группы крови

Группа Подгруппа Агглютиногены в эритроцитах Агглютинины в сыворотке крови Распространённость

0аР нет нет а и в 33,5%

Ар (II) А1(П) А2(П) А1 В1 в (а2- крайне редко) Р(аг в 20% случаев) 32,1% 5,7%

Ва(Ш) нет В а 20,6%

АВо(^) АВ(1У) А2В(1У) А1 и В А2 и В нет (а2- крайне редко) нет(аг в 20% случаев) 6,8% 1,3%

Группы крови по системе АВ0

Агглютиноген А j и А2 отличаются друг от друга по свойствам.

• подтип А1 обладает большей адсорбционной возможностью по сравнению с агглютиногеном А2, он сильнее адсорбирует агглютинин а из сыворотки, поэтому его называют сильным, а подтип А2 — слабым.

• эритроциты с агглютиногеном А2 имеют более низкую агглютинабельность.

• подгруппы с агглютиногенами А1 и А2 обладают различными свойствами сывороток. Сыворотка подгрупп А2 (II) и А2В (IV) довольно часто содержит агглютинин, названный Ландштейнером и Левином экстраагглютинином aj, дающим агглютинацию только с эритроцитами А1 и не дающим агглютинации с эритроцитами А2. В то же время в сыворотке подгрупп A(II) и AB(IV) довольно редко, но встречается экстраагглютинин a2, не агглютинирующий эритроциты Aj, а дающий агглютинацию с эритроцитами А2.

Существуют варианты эритроцитов с ещё более слабовыраженными агглютинабельными свойствами, что связано с наличием в них подтипов А3, А4, Az и др. Несмотря на то, что эти слабые антигены встречают довольно редко, но они имеют определённое клиническое значение.

• групповой антиген В отличается большей однородностью. Описанные редкие его варианты (В2, В3, Bw и др.) существенного клинического значения не имеют;

• позже в первой группе крови 0(1) была найдена специфическая субстанция, также обозначенная символом «0». Фактор 0 — агглютиноген, присущий эритроцитам групп 0(I), A2(II), A2B(IV).

Для эритроцитов всех групп характерно наличие субстанции Н, её считают общим веществом-предшественником. Субстанцию Н чаще встречают у лиц с первой группой крови, в других же она содержится в незначительном количестве;

• в настоящее время известны так называемые кровяные химеры, обусловленные одновременным пребыванием в организме человека эритроцитов, принадлежащих двум фенотипам АВО. В естественных условиях явление кровяной химеры встречают у близнецов. Оно может также появиться при пересадке аллогенного костного мозга или переливании массивных объёмов крови. При определении группы крови и резус -принадлежности в условиях наличия кровяной химеры, как правило, получают искажённый результат (во всех сомнительных результатах направить образцы крови в специализированную лабораторию).

Список литературы

1. Приказ Минздрава России от 09.01.1998 № 2 «Об утверждении Инструкции по иммуносерологии».

2. Приказ Минздрава России от 25.11.2002 № 363 «Об утверждении Инструкции по применению компонентов крови».

3. Требования по проведению иммуногематологических исследований доноров и реципиентов на СПК и в ЛПУ. Методические указания № 2001/109. Минздрав России, НИИ гематологии и трансфузиологии, Санкт-Петербург, 2002.

4. Минеева Н.В. Группы крови человека. Основы иммуногемотологии. СПб., 2004. 188 с.