Ошибки при подсчете тромбоцитов

Внутрисосудистый гемолиз диагностируют при выявлении анемии, повышенной плазменной концентрации свободного гемоглобина более 0,15 г/л [1], шистоцитоза (более 0,5—1%) и ретикулоцитоза [2], а также при уменьшении плазменной концентрации гаптоглобина (равной или менее 0,25 г/л), повышении концентраций билирубина и лактатдегидрогеназы (ЛДГ) [3]. Причины развития внутрисосудистого гемолиза у больных в критических состояниях могут быть различными: использование экстракорпоральной мембранной оксигенации (ЭКМО), аппаратов искусственного кровообращения, заместительной почечной терапии, устройств механической поддержки левого желудочка, ожоги, HELLP синдром, тромботическая микроангиопатия (ТМА), пароксизмальная ночная гемоглобинурия и прочее [4—9]. При внутрисосудистом гемолизе происходит механическое разрушение эритроцитов, в результате чего образуются их обломки и фрагменты, которые циркулируют в крови и могут влиять на результаты автоматического подсчета форменных элементов крови, в частности, тромбоцитов.

В литературе приведено описание клинического наблюдения, в котором у 57-летнего больного с термическими ожогами выявлен тромбоцитоз 1121⋅10⁹/л, в то время как при визуальном подсчете тромбоцитов в мазке крови их количество составило 173⋅10⁹/л [10].

Авторы объясняют выявленную ошибку подсчета тромбоцитов тем, что гематологический анализатор расценил как тромбоциты фрагменты эритроцитов, образовавшиеся вследствие термической травмы и гемолиза [10].

В другом исследовании на примере 40 больных, в крови которых выявлялись фрагментированные эритроциты, показано, что наличие фрагментированных эритроцитов является основной ошибкой при автоматическом подсчете тромбоцитов крови. Отмечена сильная корреляция между количеством фрагментированных эритроцитов, выявленных с помощью проточной флуоцитометрии или при визуальном подсчете, и избыточным количеством клеток крови, определяемых автоматическим анализатором как тромбоциты [11]. Как недооценка, так и переоценка количества тромбоцитов крови у больных в критических состояниях могут иметь существенные клинические последствия, прежде всего у больных, получающих антикоагулянты (при проведении экстракорпоральных методов лечения — ЭКМО, заместительной почечной терапии и т. д.).

Цель исследования — на основании собственных клинических наблюдений и экспериментальных данных представить возможные ошибки определения количества тромбоцитов крови у больных с внутрисосудистым гемолизом.

Исследование состояло из двух частей. В первой части приведено клиническое наблюдение 2 больных с внутрисосудистым гемолизом, у которых выявлено несоответствие количества тромбоцитов крови при определении с помощью гематологического анализатора и путем визуального подсчета.

Во второй части иследования in vitro двумя методами воспроизведен внутрисосудистый гемолиз и установлена связь между выраженностью гемолиза и количеством клеток, определяемых гематологическим анализатором как тромбоциты.

Наличие внутрисосудистого гемолиза подтверждали при выявлении анемии в отсутствие признаков кровотечения, уменьшении сывороточной концентрации гаптоглобина менее 0,25 г/л, повышении сывороточной активности ЛДГ более 378 МЕ/л, повышении плазменной концентрации свободного гемоглобина более 0,15 г/л, концентрации шистоцитов крови более 1%.

Кровь для исследования набирали из артериального катетера, установленного в бедренную артерию. Концентрацию форменных элементов и гемоглобина крови определяли на автоматическом анализаторе Sysmex XP-300 («Sysmex Corporation», Япония). Одновременно с автоматическим подсчетом форменных элементов крови проводили определение количества тромбоцитов визуальным методом (микроскопия) [12]. Количество шистоцитов считали в мазках крови, согласно рекомендациям Международного совета по стандартизации в гематологии по идентификации шистоцитов [13]. Определение концентрации свободного гемоглобина плазмы производили на анализаторе гемоглобина крови HemoСue Plasma Low Hb («HemoCue AB», Швеция).

В экспериментальной части работы воспроизводили гемолиз в различных условиях. Термический гемолиз получали путем нагревания 5 мл эритроцитной взвеси, помещенной в пробирки S-Monovette («Sarstedt AG&Co.», Германия) с 3,2% цитратом натрия в термостате при температуре 50 ^оС в течение 60 мин. Подсчет форменных элементов крови проводили на Sysmex XP-300 («Sysmex Corporation», Япония) до и после индукции гемолиза. Термический гемолиз проведен в 11 пробах эритроцитной взвеси.

Механический гемолиз проведен вручную в 10 пробах эритроцитной взвеси путем нагнетания и аспирации эритроцитной взвеси с помощью шприцев через колонку «Depletion tubing set (DTS) 261−01» от аппарата CliniMACS Plus («Miltenyi Biotec GmbH», Германия), содержащую металлические шарики, в течение 10 мин. Эритроциты разрушались вследствие создаваемого разряжения и действия металлических шариков, которыми наполнена система. Наличие гемолиза подтверждалось обнаружением повышения концентрации свободного гемоглобина во взвеси.

Статистический анализ. Результаты представлены в виде диаграммы рассеяния, на которой отдельно горизонтальными линиями указаны медианы (Ме). Для оценки различий между двумя независимыми выборками использован U-критерий Манна—Уитни. В случае двух зависимых выборок использован критерий Уилкоксона. Порог статистической значимости р принят равным 0,05. Для построения оптимальной регрессионной модели использована процедура «подгонки кривых», в качестве приемлемой модели отбирали модель с наибольшим коэффициентом детерминации. Данные представлены в виде медианы и межквартильного интервала Ме (25-й перцентиль; 75-й перцентиль).

Больная Г., 64 лет, диагноз — острый промиелоцитарный лейкоз, поступила в отделение реанимации и интенсивной терапии ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Минздрава России в связи с острой дыхательной недостаточностью, вызванной двусторонней субтотальной пневмонией, возникшей в период миелотоксической панцитопении после химиотерапии (концентрации лейкоцитов крови 0,1⋅10⁹/л, тромбоцитов 36⋅10⁹/л, гемоглобина 67 г/л). Больная в первые же сутки переведена на искусственную вентиляцию легких, а затем в связи с сохраняющейся гипоксемией (индекс оксигенации РаО₂/FiO₂составил 61) начато проведение вено-венозной ЭКМО. При проведении ЭКМО осуществляли непрерывную инфузию (200—500 ед/ч) нефракционированного гепарина, сохраняя активированное частичное тромбопластиновое время в пределах 60—80 сек, концентрацию тромбоцитов крови поддерживали путем трансфузий концентратов тромбоцитов не ниже 80⋅10⁹/л. Подсчет тромбоцитов крови проводили на гематологическом анализаторе 4 раза в сутки. Отрицательное давление в бедренной канюле было от –150 до –160 мм рт.ст., градиент давления до и после оксигенатора составил 40—60 мм рт.ст., скорость кровотока — 3,7—5 л/мин, плазменная концентрация свободного гемоглобина плазмы — 1,1 г/л.

На 7-е сутки проведения ЭКМО отмечены вибрация насоса, увеличение потребности в трансфузиях эритроцитов, повышение плазменной концентрации свободного гемоглобина до 4,7 г/л. Причиной гемолиза могла быть высокая скорость кровотока через оксигенатор (5 л/мин, 4000 об/мин). У больной сохранялся миелотоксический агранулоцитоз, но при этом количество тромбоцитов крови не только стабилизировалось, но стало даже увеличиваться без трансфузий, достигнув 166⋅10⁹/л, а затем в течение дня — до 296⋅10⁹/л, что было возможно, учитывая время, прошедшее после химиотерапии, и ожидаемое восстановление тромбоцитопоэза. Однако при этом у больной значительно усилился геморрагический синдром: появились петехиальные кровоизлияния на коже и слизистых, кровотечения из мест установки сосудистых канюль, носовое кровотечение. Это послужило основанием для визуального пересчета количества тромбоцитов крови. При микроскопии выявлено значительное количество фрагментированных эритроцитов, расцениваемых анализатором как тромбоциты, а истинное количество тромбоцитов крови составило 11⋅10⁹/л (рис. 1).

После трансфузии концентрата тромбоцитов геморрагический синдром купирован. В дальнейшем при проведении трансфузионной терапии ориентировались только на количество тромбоцитов, определенных при микроскопии, поскольку сохранялась разница между результатами их автоматического и визуального подсчета. При нарастании гемолиза (концентрация свободного гемоглобина плазмы увеличилась до 7 г/л) количество тромбоцитов крови, по данным автоматического гематологического анализатора, было 378⋅10⁹/л, а при микроскопии — 17⋅10⁹/л.

У больной З., 27 лет, в марте 2013 г. установлен Т-клеточный острый лимфобластный лейкоз, начата химиотерапия по протоколу «ОЛЛ-2009» [14].

20 ноября 2017 г. выполнена трансплантация аллогенного костного мозга. Спустя 100 дней достигнут 100% донорский химеризм. Больная выписана из стационара для проведения амбулаторного лечения.

27 февраля 2018 г. больная госпитализирована в связи с появлением галлюцинаций, анемии (концентрация гемоглобина крови 52 г/л), петехиальной сыпи на коже в отсутствие признаков кровотечения, олигурии, азотемии (концентрация креатинина сыворотки 300 мкмоль/л) (рис. 2, а).

На электрокардиограмме выявлено острое повреждение миокарда, выполнена коронарография, при которой обнаружена тромботическая окклюзия правой коронарной артерии, произведены механическая реканализация, баллонная ангиопластика и стентирование правой коронарной артерии.

Прямая проба Кумбса при этом была отрицательной, шистоциты в крови — 4,1%, сывороточная концентрация ЛДГ — 7997 МЕ/л (референсные значения 378 МЕ/л). В плазме крови: концентрация свободного гемоглобина 2 г/л (норма до 0,07 г/л), активность металлопротеиназы ADAMTS 13 — 50%, уровень D-димера — 7975 нг/мл, активированное частично тромбопластиновое время — 29 сек, протромбиновый индекс — 91%, уровень фибриногена — 2,2 г/л. При исследовании на двух гематологических анализаторах (Sysmex XP-300 и Sysmex КX-21N) количество тромбоцитов крови составило 155⋅10⁹/л и 113⋅10⁹/л (см. рис. 2, б).

На основании клинико-лабораторных данных установлена трансплант-ассоциированная ТМА, протекающая с внутрисосудистым гемолизом, анемией, тромбоцитопенией, острой почечной недостаточностью, нарушением сознания, острым инфарктом миокарда. В то же время обращало на себя внимание несоответствие между выраженностью кожного геморрагического синдрома (см. рис. 2, а) и количеством тромбоцитов крови (рис. 3)

в отсутствие значительных отклонений в коагулограмме. Произведен визуальный подсчет тромбоцитов крови. Определены многочисленные фрагментированные эритроциты и шистоциты (до 4%), что подтвердило диагноз ТМА [15]. Концентрация тромбоцитов крови составила всего 13⋅10⁹/л, т. е. анализаторы ошибочно подсчитывали в качестве тромбоцитов осколки эритроцитов (см. рис. 3). В дальнейшем количество тромбоцитов крови определяли у этой больной только с помощью визуального подсчета.

Термический гемолиз проведен в 11 пробах эритроцитной взвеси. Исходно в пробах эритроцитной взвеси определены минимальный свободный гемоглобин медиана 0,2 (0,1; 0,2) г/л и лишь единичные тромбоциты медиана 2 (0; 5)⋅10⁹/л.

После инкубации в термостате при 50 ^оС в течение 1 ч в пробах регистрировали гемолиз: концентрация свободного гемоглобина составила 1,4 (1,2; 3,2) г/л. Гематологический анализатор в результате гемолиза во всех пробах ошибочно выявлял клетки, которые расценивались как тромбоциты: 486 (389; 850)·10⁹/л.

Причем этих клеток было тем больше, чем более выражен гемолиз в пробе (рис. 4, а).

Имелась кубическая зависимость между концентрацией свободного гемоглобина в эритроцитной взвеси и ошибочно определяемой гематологическим анализатором концентрацией тромбоцитов в ней (см. рис. 4, б).

При механическом гемолизе также после появления свободного гемоглобина в пробах стали определяться «тромбоциты», которых не было до воздействия: свободный гемоглобин увеличился с 0,2 (0,1; 0,2) г/л до 14,6 (9,7; 18,7) г/л (р<0,001), а концентрация тромбоцитов, определяемая гематологическим анализатором, увеличилась с 0 (0; 2,8)·10⁹/л до 60,9 (42; 72)·10⁹/л (р<0,001).

В первом клиническом наблюдении внутрисосудистый гемолиз возник при проведении ЭКМО — аппаратного метода замещения функции газообмена и/или кровообращения у пациентов, находящихся в критическом состоянии [16, 17]. Гемолиз при проведении ЭКМО является серьезным осложнением. Повышение концентрации свободного гемоглобина плазмы при ЭКМО является независимым предиктором смертности (отношение шансов 3,4; 95% доверительный интервал от 1,3 до 8,8, р=0,011) [7]. Современные аппараты ЭКМО позволяют уменьшить гемолиз, обусловленный травмой эритроцитов насосом. На гемолиз не влияет продолжительность проведения ЭКМО [6], но наиболее выраженный гемолиз отмечен в первые 5 мин экстракорпорального кровообращения [18]. Причиной механического гемолиза при проведении ЭКМО является не столько механическое повреждение эритроцитов насосом, сколько генерируемое им отрицательное давление [1, 19], приводящее к возникновению феномена кавитации, при котором образуются микропузырьки вакуума внутри эритроцитов, приводящие к их разрыву [1, 20].

Кавитация возникает, если кровь подвергается избыточному отрицательному давлению, превышающему –650 мм рт.ст., и при скорости насоса более 3000 об/мин [19]. Меньшее отрицательное давление и скорость насоса обычно не вызывают кавитации и гемолиза [1]. Среди других причин гемолиза при ЭКМО называют аспирацию крови через канюли малого диаметра, способствующую кавитации [21]. Еще одной причиной является работа насоса. В проспективном рандомизированном исследовании показано, что вид насоса (центрифужный или роликовый) не играет существенной роли в возникновении гемолиза [6], но даже в отсутствие клинически значимого гемолиза необходимо учитывать, что действие насоса приводит к субгемолитической механической травме эритроцитов [22]. Гемолиз может явиться одним из проявлений тромбообразования, которое может возникнуть в любом участке экстракорпорального контура [23, 24]. В представленном наблюдении косвенным проявлениями тромбоза в головке насоса явились появление шума при его работе, ощущаемая вибрация и гемолиз [21, 25]. Внутрисосудистый гемолиз встречается с частотой от 1,7 [21] до 5,7% [26] у взрослых и в 10,4% случаев у детей [26]. Современные аппараты ЭКМО позволяют значительно снизить риск возникновения этой патологии [1]. В первом наблюдении большая скорость кровотока, необходимая для поддержания оксигенации крови, и, вероятно, частичный тромбоз, о котором косвенно свидетельствовали появившиеся шум и вибрация, способствовали развитию гемолиза.

Во втором наблюдении внутрисосудистый гемолиз был признаком ТМА. Группа ТМА включает в себя различные заболевания: тромботическую тромбоцитопеническую пурпуру (ТТП), атипичный гемолитико-уремический синдром (ГУС), типичный ГУС, пневмококковый ГУС, трансплант-ассоциированную ТМА (ТА-ТМА), а также ряд вторичных ТМА, ассоциированных с различными заболеваниями. Все эти заболевания отличаются патогенезом. Это может быть активация системы комплемента при ГУС [5, 27], дефицит металлопротеиназы ADAMTS 13 при ТТП [5], действие нейраминидазы, выделяемой пневмококком при пневмококковом ГУС [28], выделение шига-токсина при типичном ГУС [5] и т. д. Несмотря на разный патогенез, заболевания из группы ТМА имеют сходные клинические проявления: микроангиопатическая гемолитическая анемия, проявляющаяся внутрисосудистым гемолизом, тромбоцитопения потребления и ишемические повреждения органов [5]. В настоящем наблюдении инфекция спровоцировала развитие у больной трансплант-ассоциированной ТМА.

Общим в обоих клинических наблюдениях явились ошибки в определении количества тромбоцитов крови с помощью гематологического анализатора. Одним из признаков внутрисосудистого гемолиза как при ТМА, так и при ЭКМО, является появление фрагментированных эритроцитов [29]. Наличие в крови фрагментированных эритроцитов, имеющих размер, сходный с тромбоцитами, может стать причиной ошибки при автоматическом подсчете тромбоцитов. Обнаружена корреляция между количеством фрагментированных эритроцитов и количеством тромбоцитов, ошибочно определяемых гематологическим анализатором (r=0,60; p<0,01) [11]. В экспериментах in vitro механический гемолиз, полученный с использованием гематологического гомогенизатора, приводил при автоматическом подсчете к увеличению показателя количества тромбоцитов до 393±101,3·10⁹/л по сравнению с образцами крови, которые не подвергались гомогенизации (247±29,1·10⁹/л; р=0,04), что авторы объясняют ошибочным распознаванием гематологическим анализатором обломков клеток и тканей как тромбоцитов [30]. Именно этим феноменом можно объяснить увеличение показателя количества тромбоцитов в экспериментах в настоящей работе. Мы специально использовали эритроцитную взвесь, в которой отсутствуют тромбоциты. После разрушения эритроцитов с помощью нагревания при автоматическом подсчете количество клеток, определяемых гематологическим анализатором как тромбоциты, увеличивалось пропорционально степени выраженности гемолиза, приводя к развитию феномена «псевдотромбоцитоза». Этот феномен объясняется увлечением количества осколков эритроцитов диаметром 2—5 мкм, распознаваемых как тромбоциты. Подобные ошибки в измерении количества тромбоцитов могут вызывать не только осколки эритроцитов, но и криоглобулины, криофибриноген, бактерии [31].

При механическом гемолизе в крови также увеличивалось количество клеток, распознаваемых гематологическим анализатором как тромбоциты, но их количество было значительно меньше, чем при термическом гемолизе, хотя выраженность механического гемолиза была больше. Это можно объяснить большими по размеру осколками фрагментированных эритроцитов при механическом разрушении, поэтому и распознаваемых как тромбоциты клеток было меньше.

Таким образом, при наличии внутрисосудистого гемолиза подсчет тромбоцитов крови необходимо обязательно проводить визуальным методом, поскольку при подсчете с помощью гематологического анализатора фрагментированные эритроциты ошибочно распознаются как тромбоциты. Это может не только привести к нераспознаванию тромбоцитопении, но и быть ложно расценено как тромбоцитоз и повлиять на тактику лечения. Проблема подсчета количества тромбоцитов в условиях гемолиза может быть решена применением гематологических анализаторов, использующих для подсчета клеток технологию флуоресцентной проточной цитометрии, при которой вместо простой оценки размера клеток определяются содержимое РНК/ДНК, размер клетки и сложность внутреннего строения. Такой подход позволяет обеспечить высокоточные результаты и дифференциацию клеток и клеточных обломков.

Финансирование. Исследование не имело финансовой поддержки.

Участие авторов:

Концепция и дизайн исследования — Г. М. Галстян

Сбор и обработка материала — С.А. Налбандян, С.Ю. Бронякина, Д.В. Камельских, Г. М. Галстян

Статистическая обработка — М.Ю. Дроков, Г. М. Галстян

Написание текста — Г.М. Галстян, С.А. Налбандян

Редактирование — Г. М. Галстян

Авторы заявляют
об
отсутствии конфликта интересов.

The authors declare no conflicts interest.

Анестезиология и реаниматология 2019, №4, с. 61-67

https://doi.org/10.17116/anaesthesiology201904161

Russian Journal of Anaesthesiology and Reanimatology

2019, №4, pp. 61-67 https://doi.org/10.17116/anaesthesiology201904161

Ложное определение количества тромбоцитов крови при внутрисосудистом гемолизе

© Г.М. ГАЛСТЯН, С.А. НАЛБАНДЯН, В.Н. ДВИРНЫК, С.Ю. БРОНЯКИНА, Д.В. КАМЕЛЬСКИХ, М.Ю. ДРОКОВ

ФГБУ «Национальным медицинским исследовательским центр гематологии» Минздрава России, 125167, Москва, Россия

Внутрисосудистый гемолиз сопровождается образованием фрагментов эритроцитов, распознаваемых гематологическим анализатором как тромбоциты.

Цель исследования — на основании собственных клинических наблюдений и экспериментальных данных представить возможные ошибки определения количества тромбоцитов крови у больных с внутрисосудистым гемолизом. Материал и методы. В двух клинических наблюдениях у больных с внутрисосудистым гемолизом, вызванным экстракорпоральной мембранной оксигенацией и тромботической микроангиопатией, выявлено несоответствие количеств тромбоцитов крови, определенных гематологическими анализаторами (Sysmex XP-300 и Sysmex KX-21N, «Sysmex Corporation», Япония) и при визуальном подсчете. In vitro воспроизвели внутрисосудистый гемолиз путем нагревания и механического разрушения эритроцитов в эритроцитной взвеси. Исследовали связь между гемолизом и количеством клеток, определяемых как тромбоциты. Термический гемолиз достигали нагреванием 11 образцов эритроцитной взвеси в термостате до 50 оС в течение 1 часа. Механический гемолиз достигали путем нагнетания и аспирации 10 проб эритроцитной взвеси через колонку Depletion tubing set (DTS) 261-01 (CliniMACS® Plus, «Miltenyi Biotec GmbH», Германия). Наличие гемолиза подтверждали при повышении концентрации свободного гемоглобина плазмы. Для оценки различий между выборками использовали U-критерий Манна—Уитни и критерий Уилкоксона.

Результаты. У больных с внутрисосудистым гемолизом выявлено несоответствие между выраженностью геморрагического синдрома и количеством тромбоцитов крови, определяемого гематологическим анализатором. При сравнении количества тромбоцитов крови у больных, определяемого анализатором, с данными визуальной микроскопии выявлено их завышение: на счетчике соответственно 29-109/л и 155-109/л, при визуальном подсчете соответственно 11 -109/л и 13-109/л. In vitro после термического гемолиза медиана концентрации клеток, расцениваемых ошибочно анализатором как тромбоциты, увеличилась с 2 (0; 5)-109/л до 486 (389; 850)-109/л; после механического гемолиза — с 0 (0; 2,8)-109/л до 60,9 (42; 72)-109/л. Заключение. При внутрисосудистом гемолизе подсчет тромбоцитов крови необходимо проводить визуальным методом.

Ключевые слова: внутрисосудистый гемолиз, тромбоциты, экстракорпоральная мембранная оксигенация, тромботическая микро-

Информация об авторах:

Галстян Г.М. — https://orcid.org/0000-0001-8818-8949; e-mail: gengalst@gmail.com Налбандян С.А. — https://orcid.org/0000-0002-3009-156X; e-mail: siranushik1995@gmail.com Двирнык В.Н. — https://orcid.org/0000-0002-9808-8519; e-mail: dvirnyk.v@blood.ru Бронякина С.Ю. — https://orcid.org/0000-0003-1492-1735; e-mail: maml.s-yur@yandex.ru Камельских Д.В. — https://orcid.org/0000-0002-1118-6969

Дроков М.Ю. — https://orcid.org/0000-0001-9431-8316; e-mail: drokov.m@blood.ru Автор, ответственный за переписку: Галстян Г.М. — e-mail: gengalst@gmail.com

КАК ЦИТИРОВАТЬ:

Галстян Г.М., Налбандян С.А., Двирнык В.Н., Бронякина С.Ю., Камельских Д.В., Дроков М.Ю. Ложное определение количества тромбоцитов крови при внутрисосудистом гемолизе. Анестезиология и реаниматология. 2019;4: 61-67. https://doi.org/10.17116/anaes-thesiology201904161

Spuriously high platelet counts caused by intravascular haemolysis

© G.M. GALSTYAN, S.A. NALBANDYAN, V.N. DVIRNYK, S.YU. BRONYAKINA, D.V. KAMEL’SKIKH, M.Yu. DROKOV National research center for hematology, Ministry of Health of Russia, Moscow, Russia

Introduction — intravascular hemolysis is accompanied by the formation of erythrocyte fragments, which can be recognized by the hematology analyzer as platelets.

The aim of the study was to present possible errors of platelets count estimated in patients with intravascular hemolysis. Material and methods. Clinical reports of two patients with intravascular hemolysis were presented. In both patients hematological

РЕЗЮМЕ

ангиопатия.

ABSTRACT

analyzer falsely estimated the increase of platelets count. In experimental part intravascular hemolysis was reproduced in vitro by heating and mechanical destruction of red blood cells (RBC) in RBC concentrates. The relationship between hemolysis and platelets count was investigated. Thermal hemolysis was achieved by heating 11 samples of RBC concentrates in a thermostat at 50 °C. Mechanical hemolysis was achieved by forcing and aspiration of 10 samples of RBC concentrates through a DTS column (CliniMACS Plus, Germany). Hemolysis was confirmed by increased concentration of free plasma hemoglobin. Blood cell count was performed by Sysmex XP-300. The Mann-Whitney U-criterion was used to assess the differences between two independent samples. The difference between two dependent samples was assessed by the Wilcoxon criterion.

Results. A discrepancy between hemorrhagic syndrome and platelets count (respectively, 29 6-109/l and 155- 109/l) estimated by hematological analyzer was revealed in both patients with intravascular hemolysis associated with extracorporeal membrane oxygenation and thrombotic microangiopathy. However, platelets count, estimated by microscopy was 11 -109/l and 1 3-109/l, respectively. In samples of RBC concentrates with thermal hemolysis the platelets count increased from a median of 2-109/l to a median of 486-109/l, in RBC concentrate samples with mechanical hemolysis — from the median 0-109/l to the median 60,9-109/l. The source of platelets count errors was incorrectly identification of RBC fragments as platelets by hematological analyzer. Conclusion. Intravascular hemolysis requires blood platelet count by visual method.

Keywords: intravascular hemolysis, platelets, extracorporeal membrane oxygenation, thrombotic microangiopathy. Information about authors:

Galstyan G.M. — https://orcid.org/0000-0001-8818-8949 Nalbandyan S.A. — https://orcid.org/0000-0002-3009-156X Dvirnyk V.N. — https://orcid.org/0000-0002-9808-8519 Bronyakina S.Yu. — https://orcid.org/0000-0003-1492-1735 Kamel’skikh D.V. — https://orcid.org/0000-0002-1118-6969 Drokov M.Yu. — https://orcid.org/0000-0001-9431-8316 Corresponding author: Galstyan G.M. — e-mail: gengalst@gmail.com

TO CITE THIS ARTICLE:

Galstyan GM, Nalbandyan SA, Dvirnyk VN, Bronyakina SYu, Kamel’skikh DV, Drokov MYu. Spuriously high platelet count caused by intravascular haemolysis. Russian Journal of Anaesthesiology and Reanimatology = Anesteziologiya IReanimatologiya. 2019;4:61-67. (In Russ.). https:// doi.org/10.17116/anaesthesiology201904161

Внутрисосудистый гемолиз диагностируют при выявлении анемии, повышенной плазменной концентрации свободного гемоглобина более 0,15 г/л [1], шистоцитоза (более 0,5—1%) и ретикулоцитоза [2], а также при уменьшении плазменной концентрации гаптоглобина (равной или менее 0,25 г/л), повышении концентраций билирубина и лактатдегидрогеназы (ЛДГ) [3]. Причины развития вну-трисосудистого гемолиза у больных в критических состояниях могут быть различными: использование экстракорпоральной мембранной оксигенации (ЭКМО), аппаратов искусственного кровообращения, заместительной почечной терапии, устройств механической поддержки левого желудочка, ожоги, HELLP синдром, тромботическая ми-кроангиопатия (ТМА), пароксизмальная ночная гемогло-бинурия и прочее [4—9]. При внутрисосудистом гемолизе происходит механическое разрушение эритроцитов, в результате чего образуются их обломки и фрагменты, которые циркулируют в крови и могут влиять на результаты автоматического подсчета форменных элементов крови, в частности, тромбоцитов.

В литературе приведено описание клинического наблюдения, в котором у 57-летнего больного с термическими ожогами выявлен тромбоцитоз 1121-109/л, в то время как при визуальном подсчете тромбоцитов в мазке крови их количество составило 173-109/л [10].

Авторы объясняют выявленную ошибку подсчета тромбоцитов тем, что гематологический анализатор расценил как тромбоциты фрагменты эритроцитов, образовавшиеся вследствие термической травмы и гемолиза [10].

В другом исследовании на примере 40 больных, в крови которых выявлялись фрагментированные эритроциты, показано, что наличие фрагментированных эритро-

цитов является основной ошибкой при автоматическом подсчете тромбоцитов крови. Отмечена сильная корреляция между количеством фрагментированных эритроцитов, выявленных с помощью проточной флуоцитометрии или при визуальном подсчете, и избыточным количеством клеток крови, определяемых автоматическим анализатором как тромбоциты [11]. Как недооценка, так и переоценка количества тромбоцитов крови у больных в критических состояниях могут иметь существенные клинические последствия, прежде всего у больных, получающих антикоагулянты (при проведении экстракорпоральных методов лечения — ЭКМО, заместительной почечной терапии и т.д.).

Цель исследования — на основании собственных клинических наблюдений и экспериментальных данных представить возможные ошибки определения количества тромбоцитов крови у больных с внутрисосудистым гемолизом.

Материал и методы

Исследование состояло из двух частей. В первой части приведено клиническое наблюдение 2 больных с внутрисосудистым гемолизом, у которых вьгявлено несоответствие количества тромбоцитов крови при определении с помощью гематологического анализатора и путем визуального подсчета.

Во второй части иследования in vitro двумя методами воспроизведен внутрисосудистый гемолиз и установлена связь между выраженностью гемолиза и количеством клеток, определяемых гематологическим анализатором как тромбоциты.

Наличие внутрисосудистого гемолиза подтверждали при выявлении анемии в отсутствие признаков кровотече-

ния, уменьшении сывороточной концентрации гаптогло-бина менее 0,25 г/л, повышении сывороточной активности ЛДГ более 378 МЕ/л, повышении плазменной концентрации свободного гемоглобина более 0,15 г/л, концентрации шистоцитов крови более 1%.

Кровь для исследования набирали из артериального катетера, установленного в бедренную артерию. Концентрацию форменных элементов и гемоглобина крови определяли на автоматическом анализаторе Sysmex XP-300 («Sysmex Corporation», Япония). Одновременно с автоматическим подсчетом форменных элементов крови проводили определение количества тромбоцитов визуальным методом (микроскопия) [12]. Количество шистоцитов считали в мазках крови, согласно рекомендациям Международного совета по стандартизации в гематологии по идентификации шистоцитов [13]. Определение концентрации свободного гемоглобина плазмы производили на анализаторе гемоглобина крови HemoCue Plasma Low Hb («HemoCue AB», Швеция).

В экспериментальной части работы воспроизводили гемолиз в различных условиях. Термический гемолиз получали путем нагревания 5 мл эритроцитной взвеси, помещенной в пробирки S-Monovette («Sarstedt AG&Co.», Германия) с 3,2% цитратом натрия в термостате при температуре 50 оС в течение 60 мин. Подсчет форменных элементов крови проводили на Sysmex XP-300 («Sysmex Corporation», Япония) до и после индукции гемолиза. Термический гемолиз проведен в 11 пробах эритроцитной взвеси.

Механический гемолиз проведен вручную в 10 пробах эритроцитной взвеси путем нагнетания и аспирации эритроцитной взвеси с помощью шприцев через колонку «Depletion tubing set (DTS) 261-01» от аппарата CliniMACS Plus («Miltenyi Biotec GmbH», Германия), содержащую металлические шарики, в течение 10 мин. Эритроциты разрушались вследствие создаваемого разряжения и действия металлических шариков, которыми наполнена система. Наличие гемолиза подтверждалось обнаружением повышения концентрации свободного гемоглобина во взвеси.

Статистический анализ. Результаты представлены в виде диаграммы рассеяния, на которой отдельно горизонтальными линиями указаны медианы (Ме). Для оценки различий между двумя независимыми выборками использован ^-критерий Манна—Уитни. В случае двух зависимых выборок использован критерий Уилкоксона. Порог статистической значимости р принят равным 0,05. Для построения оптимальной регрессионной модели использована процедура «подгонки кривых», в качестве приемлемой модели отбирали модель с наибольшим коэффициентом детерминации. Данные представлены в виде медианы и межквартиль-ного интервала Ме (25-й перцентиль; 75-й перцентиль).

Результаты

Клиническое наблюдение 1

Больная Г., 64 лет, диагноз — острый промиелоцитар-ный лейкоз, поступила в отделение реанимации и интенсивной терапии ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Минздрава России в связи с острой дыхательной недостаточностью, вызванной двусторонней субтотальной пневмонией, возникшей в период миелотоксической панцитопении после химиотерапии (концентрации лейкоцитов крови 0,1-109/л, тромбоцитов 36’109/л, гемоглобина 67 г/л). Больная в первые же сутки переведена на искусственную вентиляцию легких, а затем в связи с сохраняющейся гипоксемией (индекс ок-

сигенации РаО2^Ю2составил 61) начато проведение вено-венозной ЭКМО. При проведении ЭКМО осуществляли непрерывную инфузию (200—500 ед/ч) нефракционирован-ного гепарина, сохраняя активированное частичное тром-бопластиновое время в пределах 60—80 сек, концентрацию тромбоцитов крови поддерживали путем трансфузий концентратов тромбоцитов не ниже 80-109/л. Подсчет тромбоцитов крови проводили на гематологическом анализаторе 4 раза в сутки. Отрицательное давление в бедренной канюле было от —150 до —160 мм рт.ст., градиент давления до и после оксигенатора составил 40—60 мм рт.ст., скорость кровотока — 3,7—5 л/мин, плазменная концентрация свободного гемоглобина плазмы — 1,1 г/л.

На 7-е сутки проведения ЭКМО отмечены вибрация насоса, увеличение потребности в трансфузиях эритроцитов, повышение плазменной концентрации свободного гемоглобина до 4,7 г/л. Причиной гемолиза могла быть высокая скорость кровотока через оксигенатор (5 л/мин, 4000 об/мин). У больной сохранялся миелотоксический агранулоцитоз, но при этом количество тромбоцитов крови не только стабилизировалось, но стало даже увеличиваться без трансфузий, достигнув 166-109/л, а затем в течение дня — до 296’109/л, что было возможно, учитывая время, прошедшее после химиотерапии, и ожидаемое восстановление тромбоцитопоэза. Однако при этом у больной значительно усилился геморрагический синдром: появились петехиальные кровоизлияния на коже и слизистых, кровотечения из мест установки сосудистых канюль, носовое кровотечение. Это послужило основанием для визуального пересчета количества тромбоцитов крови. При микроскопии выявлено значительное количество фрагментирован-ных эритроцитов, расцениваемых анализатором как тромбоциты, а истинное количество тромбоцитов крови составило 11-109/л (рис. 1).

После трансфузии концентрата тромбоцитов геморрагический синдром купирован. В дальнейшем при проведении трансфузионной терапии ориентировались только на количество тромбоцитов, определенных при микроскопии, поскольку сохранялась разница между результатами их автоматического и визуального подсчета. При нараста-

Рис. 1. Фрагментированные эритроциты (указаны стрелками) в крови у больной Г. Окраска по Паппенгейму. х1000.

Fig. 1. Fragmented erythrocytes (arrows) in patient G. Pappenheim staining. х1000.

нии гемолиза (концентрация свободного гемоглобина плазмы увеличилась до 7 г/л) количество тромбоцитов крови, по данным автоматического гематологического анализатора, было 378’109/л, а при микроскопии — 17-109/л.

Клиническое наблюдение 2

У больной З., 27 лет, в марте 2013 г. установлен Т-кле-точный острый лимфобластный лейкоз, начата химиотерапия по протоколу «ОЛЛ-2009» [14].

20 ноября 2017 г. выполнена трансплантация аллоген-ного костного мозга. Спустя 100 дней достигнут 100% донорский химеризм. Больная выписана из стационара для проведения амбулаторного лечения.

27 февраля 2018 г. больная госпитализирована в связи с появлением галлюцинаций, анемии (концентрация гемоглобина крови 52 г/л), петехиальной сыпи на коже в отсут-

а б

Рис. 2. Внешний вид больной с геморрагиями на коже и гемолизированная плазма в пробирке.

а — петехиальные кровоизлияния и гематомы на коже; б — гемолиз в пробирке.

Fig. 2. Patient with hemorrhages on the skin and hemo-lyzed plasma in vitro.

a — petechial hemorrhages and hematomas on the skin; b — hemolysis in vitro.

ствие признаков кровотечения, олигурии, азотемии (концентрация креатинина сыворотки 300 мкмоль/л) (рис. 2, а). На электрокардиограмме выявлено острое повреждение миокарда, выполнена коронарография, при которой обнаружена тромботическая окклюзия правой коронарной артерии, произведены механическая реканализация, баллонная ангиопластика и стентирование правой коронарной артерии.

Прямая проба Кумбса при этом была отрицательной, шистоциты в крови — 4,1%, сывороточная концентрация ЛДГ — 7997 МЕ/л (референсные значения 378 МЕ/л). В плазме крови: концентрация свободного гемоглобина 2 г/л (норма до 0,07 г/л), активность металлопротеиназы ADAMTS 13 — 50%, уровень D-димера — 7975 нг/мл, активированное частично тромбопластиновое время — 29 сек, протромбино-вый индекс — 91%, уровень фибриногена — 2,2 г/л. При исследовании на двух гематологических анализаторах ^у8тех ХР-300 и Sysmex КХ-2Ш) количество тромбоцитов крови составило 155’109/л и 113-109/л (см. рис. 2, б).

На основании клинико-лабораторных данных установлена трансплант-ассоциированная ТМА, протекающая с внутрисосудистым гемолизом, анемией, тромбоцитопе-нией, острой почечной недостаточностью, нарушением сознания, острым инфарктом миокарда. В то же время обращало на себя внимание несоответствие между выраженностью кожного геморрагического синдрома (см. рис. 2, а) и количеством тромбоцитов крови (рис. 3) в отсутствие значительных отклонений в коагулограмме. Произведен визуальный подсчет тромбоцитов крови. Определены многочисленные фрагментированные эритроциты и шистоциты (до 4%), что подтвердило диагноз ТМА [15]. Концентрация тромбоцитов крови составила всего 13Т09/л, т.е. анализаторы ошибочно подсчитывали в качестве тромбоцитов осколки эритроцитов (см. рис. 3). В дальнейшем количество тромбоцитов крови определяли у этой больной только с помощью визуального подсчета.

Экспериментальная часть

Термический гемолиз проведен в 11 пробах эритро-цитной взвеси. Исходно в пробах эритроцитной взвеси определены минимальный свободный гемоглобин медиана 0,2 (0,1; 0,2) г/л и лишь единичные тромбоциты медиана 2 (0; 5)-109/л.

После инкубации в термостате при 50 оС в течение 1 ч в пробах регистрировали гемолиз: концентрация свободно-

Da t g Т i me Mocîcî

WBC RBC HGB HCT MOV

мен mchv; PL Г

Л7/02/201S ОЭ:32

1MB

7. S 3. so ЭО -О — 22 1 — 69. 1 1

♦ 40 7

PO» 1SS

>№’L

*javL

9/1

H PS

äf-‘i.

Date T i me Mode

ЫВС

RBC

HEB

HCT

MCV

MCH

MCHC

PLT

27/02/2018 09 :26

ШВ

7. 4*10«/L 3. 27*10’a/L 913/L -O.231L/L — 70 . 6″f L 27.Bps + 394s/L PL* 1 13*1D^/L

Клинический анализ крови

Пациент: 3

Дата рахавмип 02,06.19$1

Направил врач;

6иомат«рмал; Крое*.

Дата доставси : 27 февраля 201в г 10:50

Поклзатвпь ‘Syjime* XT-Wioa Результат

Гемоглобин (HGS> 92′

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Эритроциты (RBC) 3,27*

Гематафит <HCT) 0.26′

Средним обь*м эритроцита (WICV) 78′

Среднее содержание гемоглобина е эритроците <МСН> 2в

Средина комц. гемоглобина в эритроците (МСНС) 361

Степень аниэоцитом эритроцитов (RDW-CV) 18.6*

Тромбоциты (PLT) 32′

Количество тромбоцитов при ммфоскопин 13″

Ретик-уПОЦИТЫ |RET%> 0,67

Ретикулоциты (RET) 21.9

Лейкоциты (WBCt 7.42

Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) 14

Рис. 3. Результаты подсчета количества тромбоцитов крови на двух гематологических анализаторах и количество тромбоцитов при микроскопии.

Fig. 3. Automatized platelets count in two hematological analyzers and visual count using microscopy.

Рис. 4. Связь между выраженностью гемолиза и количеством клеток крови, определяемых как тромбоциты гематологическим анализатором.

а — количество клеток, определяемых как тромбоциты, при различных концентрациях свободного гемоглобина в пробе; б — корреляция между определяемым гематологическим анализатором количеством «тромбоцитов» и свободным гемоглобином в пробе.

Fig. 4. Relationship between severity of hemolysis and the number of blood cells defined as platelets in hematological analyzer.

a — number of cells defined as platelets with different concentrations of free hemoglobin in the sample; b — correlation between «platelets» count determined by hematological analyzer and free hemoglobin in the sample.

го гемоглобина составила 1,4 (1,2; 3,2) г/л. Гематологический анализатор в результате гемолиза во всех пробах ошибочно выявлял клетки, которые расценивались как тромбоциты: 486 (389; 850)-109/л.

Причем этих клеток было тем больше, чем более выражен гемолиз в пробе (рис. 4, а). Имелась кубическая зависимость между концентрацией свободного гемоглобина в эритроцитной взвеси и ошибочно определяемой гематологическим анализатором концентрацией тромбоцитов в ней (см. рис. 4, б).

При механическом гемолизе также после появления свободного гемоглобина в пробах стали определяться «тромбоциты», которых не было до воздействия: свободный гемоглобин увеличился с 0,2 (0,1; 0,2) г/л до 14,6 (9,7; 18,7) г/л (р<0,001), а концентрация тромбоцитов, определяемая гематологическим анализатором, увеличилась с 0 (0; 2,8)-109/л до 60,9 (42; 72)-109/л (р<0,001).

Обсуждение

В первом клиническом наблюдении внутрисосудистый гемолиз возник при проведении ЭКМО — аппаратного метода замещения функции газообмена и/или кровообращения у пациентов, находящихся в критическом состоянии [16, 17]. Гемолиз при проведении ЭКМО является серьезным осложнением. Повышение концентрации свободного гемоглобина плазмы при ЭКМО является независимым предиктором смертности (отношение шансов 3,4; 95% доверительный интервал от 1,3 до 8,8, _р=0,011) [7]. Современные аппараты ЭКМО позволяют уменьшить гемолиз, обусловленный травмой эритроцитов насосом. На гемолиз не влияет продолжительность проведения ЭКМО [6], но наиболее выраженный гемолиз отмечен в первые 5 мин экстракорпорального кровообращения [18]. Причиной механического гемолиза при проведении ЭКМО является

не столько механическое повреждение эритроцитов насосом, сколько генерируемое им отрицательное давление [1, 19], приводящее к возникновению феномена кавитации, при котором образуются микропузырьки вакуума внутри эритроцитов, приводящие к их разрыву [1, 20].

Кавитация возникает, если кровь подвергается избыточному отрицательному давлению, превышающему —650 мм рт.ст., и при скорости насоса более 3000 об/мин [19]. Меньшее отрицательное давление и скорость насоса обычно не вызывают кавитации и гемолиза [1]. Среди других причин гемолиза при ЭКМО называют аспирацию крови через канюли малого диаметра, способствующую кавитации [21]. Еще одной причиной является работа насоса. В проспективном рандомизированном исследовании показано, что вид насоса (центрифужный или роликовый) не играет существенной роли в возникновении гемолиза [6], но даже в отсутствие клинически значимого гемолиза необходимо учитывать, что действие насоса приводит к субгемолитической механической травме эритроцитов [22]. Гемолиз может явиться одним из проявлений тром-бообразования, которое может возникнуть в любом участке экстракорпорального контура [23, 24]. В представленном наблюдении косвенным проявлениями тромбоза в головке насоса явились появление шума при его работе, ощущаемая вибрация и гемолиз [21, 25]. Внутрисосудистый гемолиз встречается с частотой от 1,7 [21] до 5,7% [26] у взрослых и в 10,4% случаев у детей [26]. Современные аппараты ЭКМО позволяют значительно снизить риск возникновения этой патологии [1]. В первом наблюдении большая скорость кровотока, необходимая для поддержания окси-генации крови, и, вероятно, частичный тромбоз, о котором косвенно свидетельствовали появившиеся шум и вибрация, способствовали развитию гемолиза.

Во втором наблюдении внутрисосудистый гемолиз был признаком ТМА. Группа ТМА включает в себя различные

заболевания: тромботическую тромбоцитопеническую пурпуру (ТТП), атипичный гемолитико-уремический синдром (ГУС), типичный ГУС, пневмококковый ГУС, трансплант-ассоциированную ТМА (ТА-ТМА), а также ряд вторичных ТМА, ассоциированных с различными заболеваниями. Все эти заболевания отличаются патогенезом. Это может быть активация системы комплемента при ГУС [5, 27], дефицит металлопротеиназы ADAMTS 13 при ТТП [5], действие нейраминидазы, выделяемой пневмококком при пневмококковом ГУС [28], выделение шига-токсина при типичном ГУС [5] и т.д. Несмотря на разный патогенез, заболевания из группы ТМА имеют сходные клинические проявления: микроангиопатическая гемолитическая анемия, проявляющаяся внутрисосудистым гемолизом, тромбоци-топения потребления и ишемические повреждения органов [5]. В настоящем наблюдении инфекция спровоцировала развитие у больной трансплант-ассоциированной ТМА.

Общим в обоих клинических наблюдениях явились ошибки в определении количества тромбоцитов крови с помощью гематологического анализатора. Одним из признаков внутрисосудистого гемолиза как при ТМА, так и при ЭКМО, является появление фрагментированных эритроцитов [29]. Наличие в крови фрагментированных эритроцитов, имеющих размер, сходный с тромбоцитами, может стать причиной ошибки при автоматическом подсчете тромбоцитов. Обнаружена корреляция между количеством фрагментированных эритроцитов и количеством тромбоцитов, ошибочно определяемых гематологическим анализатором (r=0,60; _р<0,01) [11]. В экспериментах in vitro механический гемолиз, полученный с использованием гематологического гомогенизатора, приводил при автоматическом подсчете к увеличению показателя количества тромбоцитов до 393±101,3Т09/л по сравнению с образцами крови, которые не подвергались гомогенизации (247±29,1Т09/л; р=0,04), что авторы объясняют ошибочным распознаванием гематологическим анализатором обломков клеток и тканей как тромбоцитов [30]. Именно этим феноменом можно объяснить увеличение показателя количества тромбоцитов в экспериментах в настоящей работе. Мы специально использовали эритроцитную взвесь, в которой отсутствуют тромбоциты. После разрушения эритроцитов с помощью нагревания при автоматическом подсчете количество клеток, определяемых гематологическим анализатором как тромбоциты, увеличивалось пропорционально степени выраженности гемолиза, приводя к развитию феномена «псевдотромбоцитоза». Этот феномен объясняется увлечением количества осколков эритроцитов диаме-

тром 2—5 мкм, распознаваемых как тромбоциты. Подобные ошибки в измерении количества тромбоцитов могут вызывать не только осколки эритроцитов, но и криогло-булины, криофибриноген, бактерии [31].

При механическом гемолизе в крови также увеличивалось количество клеток, распознаваемых гематологическим анализатором как тромбоциты, но их количество было значительно меньше, чем при термическом гемолизе, хотя выраженность механического гемолиза была больше. Это можно объяснить большими по размеру осколками фрагментированных эритроцитов при механическом разрушении, поэтому и распознаваемых как тромбоциты клеток было меньше.

Заключение

Таким образом, при наличии внутрисосудистого гемолиза подсчет тромбоцитов крови необходимо обязательно проводить визуальным методом, поскольку при подсчете с помощью гематологического анализатора фрагментиро-ванные эритроциты ошибочно распознаются как тромбоциты. Это может не только привести к нераспознаванию тром-боцитопении, но и быть ложно расценено как тромбоцитоз и повлиять на тактику лечения. Проблема подсчета количества тромбоцитов в условиях гемолиза может быть решена применением гематологических анализаторов, использующих для подсчета клеток технологию флуоресцентной проточной цитометрии, при которой вместо простой оценки размера клеток определяются содержимое РНК/ДНК, размер клетки и сложность внутреннего строения. Такой подход позволяет обеспечить высокоточные результаты и дифференциацию клеток и клеточных обломков.

Финансирование. Исследование не имело финансовой поддержки.

Участие авторов:

Концепция и дизайн исследования — Г.М. Галстян

Сбор и обработка материала — С.А. Налбандян, С.Ю. Бронякина, Д.В. Камельских, Г.М. Галстян

Статистическая обработка — М.Ю. Дроков, Г.М. Гал-стян

Написание текста — Г.М. Галстян, С.А. Налбандян

Редактирование — Г.М. Галстян

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

The authors declare no conflicts interest.

ЛИТЕРАТУРА/REFERENCES

Toomasian JM, Bartlett RH. Hemolysis and ECMG pumps in the 21st Century. Perfusion. 2011;26(1):5-6. https://doi.org/10.1177/0267659110396015

Филатов Л.Б., Томилов А.Ф., Алексеева Т.А. Гемолитическая анемия, вызванная фрагментацией эритроцитов. Клиническая онкогематология. 2011;4:346-355.

Filatov LB, Tomilov AF, Alekseeva TA. Hemolytic anemia caused by fragmentation of red blood cells. Klinicheskaya onkogematologiya. 2011;4:346-355. (In Russ.).

Barcellini W, Fattizzo B. Clinical Applications of Hemolytic Markers in the Differential Diagnosis and Management of Hemolytic Anemia. Disease Markers. 2015;2015:1-7.

Polaschegg HD. Red blood cell damage from extracorporeal circulation in

hemodialysis. Seminars in Dialysis. 2009;22:524-531.

Azoulay E, Knoebl P, Garnacho-Montero J, Rusinova K, Galstian G, Eggi-

mann P, Abroug F, Benoit D, von Bergwelt-Baildon M, Wendon J, Scully M.

Expert Statements on the Standard of Care in Critically 1ll Adult Patients With

Atypical Hemolytic Uremic Syndrome. Chest. 2017;152(2):424-434.

https://doi.org/10.1016/jxhest.2017.03.055

Passaroni AC, Felicio ML, de Campos NLKL, Silva MA de M, Yoshida WB. Hemolysis and Inflammatory Response to Extracorporeal Circulation during On-Pump CABG: Comparison between Roller and Centrifugal Pump Systems. Brazilian Journal of Cardiovascular Surgery. 2018;33(1):64-71. https://doi.org/10.21470/1678-9741-2017-0125

2.

6

7. Omar HR, Mirsaeidi M, Socias S, Sprenker C, Caldeira C, Camporesi EM, Mangar D. Plasma free hemoglobin is an independent predictor of mortality among patients on extracorporeal membrane oxygenation support. PLoS ONE. 2015;10(4):e0124034. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0124034

8. Stepanenko A, Krabatsch T, Hennig E, Kaufmann F, Jurmann B, Dra-nishnikov N, Lehmkuhl HB, Pasic M, Weng Y, Hetzer R, Potapov EV. Retrospective Hemolysis Comparison Between Patients With Centrifugal Biventricular Assist and Left Ventricular Assist Devices. ASAIO Journal. 2011;57(5):382-387.

https://doi.org/10.1097/MAT.0b013e31822c4994

9. Vercaemst L. Hemolysis in cardiac surgery patients undergoing cardiopul-monary bypass: a review in search of a treatment algorithm. The Journal of Extra-Corporeal Technology. 2008;40:257-267.

10. Zahid MA, Aslammak MS. Spurious Thrombocytosis in the Setting of Hemolytic Anemia and Microcytosis Secondary to Extensive Burn Injury. Turkish Journal of Haematology. 2018;35:200-216. https://doi.org/10.4274/tjh.2017.0466

11. Nishiyama M, Hayashi S, Futsukaichi Y, Suehisa E, Kurata Y. Fragmented red cells are the major cause of spuriously high platelet counts in patients with fragmented red cells when counts are obtained by automated blood cell counter. Rinsho Byori. 2005;53:898-903.

12. Коленкин СМ. Некоторые особенности автоматического подсчета тромбоцитов крови. Методика контроля правильности работы анализатора. Клиническая лабораторная диагностика. 2003;8:33-35. Kolenkin SM. Some features of automatic platelet count. Methods of analyzer correctness control. Klinicheskaya laboratornaya diagnostika. 2003;8:33-35. (In Russ.).

13. Zini G, d’Onofrio G, Briggs C, Erber W, Jou JM, Lee SH, McFadden S, Vives-Corrons JL, Yutaka N, Lesesve JF; International Council for Standardization in Haematology (ICSH). ICSH recommendations for identification, diagnostic value, and quantitation of schistocytes. International Journal of Laboratory Hematology. 2012;34(2):107-116. https://doi.org/10.1111/j.1751-553X.2011.01380.x

14. Савченко В.Г. Программное лечение заболеваний системы крови: Сборник алгоритмов диагностики и протоколов лечения заболеваний системы крови. М.: Практика; 2012.

Savchenko VG. Programmnoe lechenie zabolevanij sistemy krovi: Sbornik al-goritmov diagnostiki iprotokolov lecheniya zabolevanij sistemy krovi. Moscow: Praktika; 2012. (In Russ.).

15. Moiseev IS, Rzepecki P, Bogardt J, Sulek K, Koenecke C, Kornblit BT, et al. Clinical and morphological practices in the diagnosis of transplant-associated microangiopathy: a study on behalf of Transplant Complications Working Party of the EBMT. Bone Marrow Transplantation. Springer US; 2018. Available at: http://dx.doi.org/10.1038/s41409-018-0374-3 Accessed June 20, 2019.

16. Царенко С.В., Шаповаленко Т.В., Ловцевич Н.В., Прахов А.Н., Мершина Е.А. Успешное использование ЭКМО и высокочастотной осцилляторной вентиляции при лечении тяжелого легочного ОРДС: клиническое наблюдение и критический анализ концепций респираторной поддержки. Анестезиология и реаниматология. 2017;62(3):243-246.

Tsarenko SV, Shapovalenko TV, Lovtsevich NV, Prakhov AN, Mershina EA. The successful use of ECMO and high-frequency vibrational ventilation in the treatment of severe acute respiratory infections: clinical observation and critical analysis of respiratory support concepts. Anesteziologiya i reanima-tologiya. 2017;62(3):243-246. (In Russ.). http://doi.org/10.18821/0201-7563-2017-62-3

17. Щеголев А.В., Шелухин Д.А., Ершов Е.Н., Павлов А.И., Голоми-дов А.А. Эвакуация пациентов с дыхательной недостаточностью в условиях экстракорпоральной мембранной оксигенации. Анестезиология и реаниматология. 2017;62(1):32-35.

Shchegolev AV, Shelukhin DA, Ershov EN, Pavlov AI, Golomidov AA. Evacuation of patients with respiratory failure under conditions of

extracorporal membrane oxygenation. Anesteziologiya i reanimatologiya. 2017;62(1):32-35. (In Russ.). http://doi.org/10.18821/0201-7563-2017-62-1

18. Vieira Junior FU, Antunes N, Vieira RW, Alvares LM, Costa ET. Hemolysis in extracorporeal circulation: relationship between time and procedures. Revista Brasileira de Cirurgia Cardiovascular. 2012;27(4):535-541.

19. Chung M, Shiloh AL, Carlese A. Monitoring of the Adult Patient on Venoarterial Extracorporeal Membrane Oxygenation. The Scientific World Journal. 2014;2014:Article ID 393258. http://doi.org/10.1155/2014/393258

20. Готье С.В., Хомяков С.М., Абызов И.Н., Арзуманов С.В., Барба-раш Л.С., Барышников А.А., Бельских Л.В. и др. Периферическая вено-артериальная экстракорпоральная мембранная оксигенация перед трансплантацией сердца. Национальные клинические рекомендации. 2015. Доступно по: https://docviewer.yandex.ru/view/0 Ссылка активна на 22.06.2019.

Got’e SV, Khomyakov SM, Abyzov IN, Arzumanov SV, Barbarash LS, Baryshnikov AA, Bel’skikh LV et al. Perifericheskaya veno-arterial’naya ekstrakorporal’naya membrannaya oksigenaciya pered transplantaciej serdca. Nacional’nye klinicheskie rekomendacii. 2015. Available at: https://docview-er.yandex.ru/view/0 Accessed June 22, 2019. (In Russ.).

21. Lehle K, Philipp A, Zeman F, Lunz D, Lubnow M, Wendel HP, Göbölös L, Schmid C, Müller T. Technical-induced hemolysis in patients with respiratory failure supported with veno-venous ECMO — prevalence and risk factors. PLoS ONE. 2015;10(11):e0143527. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0143527

22. Sakota D, Sakamoto R, Sobajima H, Yokoyama N, Waguri S, Ohuchi K, Takatani S. Mechanical damage of red blood cells by rotary blood pumps: Selective destruction of aged red blood cells and subhemolytic trauma. Artificial Organs. 2008;32(10):785-791.

23. Лысенко М.А., Кецкало М.В., Андреев С.С., Ибрагимов И.Р., Нечаев Д.С., Рогова Л.В. Экстракорпоральная мембранная оксигенация. Под редакцией проф. Луцевича О.Э. Санкт-Петербург: Экстен Медикал; 2018.

Lysenko MA, Ketskalo MV, Andreev SS, Ibragimov IR, Nechaev DS, Rogo-va LV. Ekstrakorporal’naya membrannaya oksigenaciya. Pod redakciej prof. Lucevicha OE. Sankt-Peterburg: Eksten Medikal; 2018. (In Russ.).

24. Annich G, Lynch W, MacLaren G, Wilson J, Barlett R. ECMO. Extracorporeal Cardiopulmonary Support in Critical care. 4th ed. USA; 2012.

25. Diehl A, Gantner D. Pump head thrombosis in extracorporeal membrane oxygenation (ECMO). Intensive Care Medicine. 2018;44(3):376-377. http://doi.org/10.1007/s00134-017-4976-9

26. Extracorporeal life support Organization. ECLS Registry report. 2017. Available at: https://www.elso.org/Portals/0/Files/Reports/2017/International Summary January 2017.pdf Accessed June 22, 2019.

27. Полушин Ю.С., Шлык И.В., Добронравов В.А. Атипичный гемоли-тико-уремический синдром в отделении реанимации и интенсивной терапии — экзотика или нет? Вестник анестезиологии и реаниматологии. 2016;13(3):71-73.

Polushin YuS, Shlyk IV, Dobronravov VA. Atypical hemolytic uremic

syndrome in the intensive care unit — exotic or not? Vestnik anesteziologii i reanimatologii. 2016;13(3):71-73. (In Russ.).

28. Oliver JW, Akins RS, Bibens MK, Dunn DM. Pneumococcal Induced T-ac-tivation with Resultant Thrombotic Microangiopathy. Clinical Medicine Insights: Pathology. 2010;3:13-17.

29. Banno S, Ito Y, Tanaka C, Hori T, Fujimoto K, Suzuki T, Hashimoto T, Ue-da R, Mizokami M. Quantification of red blood cell fragmentation by the automated hematology analyzer XE-2100 in patients with living donor liver transplantation. Clinical and Laboratory Haematology. 2005;27(5):292-296.

30. De Jonge G, dos Santos TL, Cruz BR, Simionatto M, Bittencourt JIM, Krum EA, de Faria Moss, Borato DC. Interference of in vitro hemolysis complete blood count. Journal of Clinical Laboratory Analysis. 2018;32(5):e22396.

31. Brigden ML, Dalai BI. Cell Counter-Related Abnormalities. Laboratory Medicine. 1999;30:325-334.

Поступила 24.04.19 Received 24.04.19

Принята к печати 18.06.19 Accepted 18.06.19

Клинические случаи тромбоцитопении

С.В. Кулешова, А.А. Алтаева, Е.А.Кузнецова

Клинические случаи ложной и  истинной тромбоцитопении в амбулаторной практике.

ФГБУ «Поликлиника №2» Управления делами Президента РФ, 119146, Москва, Россия

Статья посвящена лабораторным нюансам диагностики тромбоцитопений в практике амбулаторно-поликлинического звена. На примере двух разных пациентов показана важность знаний базовых исследований в дифференциальной диагностике ложных и истинных тромбоцитопений.

Ключевые слова: тромбоцитопения, ЭДТА-зависимая тромбоцитопения, подсчёт тромбоцитов по Фонио.

В деятельности клинико-диагностической лаборатории  амбулаторно-поликлинического звена на долю общего анализа крови приходится до 30% от всех  выполненных анализов.

Обычно общий клинический анализ крови состоит из данных гематологического анализатора, а при отклонении в лейкоформуле – и дифференцированного подсчета лейкоцитов в мазке крови при световой микроскопии.

Сегодняшний уровень гематологических анализаторов позволяет выдавать до 70% результатов анализов без микроскопии мазка.

Тем не менее, врач  не должен слепо доверять лабораторным анализаторам, а должен быть последней инстанцией, после проверки и одобрения которой результаты будут валидированы.

В работе врача клинической лабораторной диагностики мелочей не бывает. В потоке работы выбрать из  данных гематологического анализатора те, которые нуждаются в дополнительных исследованиях, непросто. Примером необходимости широкого круга знаний и умений врача КДЛ может служить тромбоцитопения — снижение числа тромбоцитов в отсутствие иных отклонений при подсчете форменных элементов и в мазке крови. К тромбоцитопениям относят состояния, при которых количество тромбоцитов периферической крови составляет менее 150 х 109/л. Количество тромбоцитов 50х109/л еще позволяет проводить полостные операции при сохранении гемостаза. Количество тромбоцитов ≤ 20 х109/л. относится  к критическим величинам с точки зрения клинической лабораторной диагностики [1]. Таким пациентам , согласно национальному стандарту показана трансфузия тромбоцитного концентрата [2].  Для подсчёта количества тромбоцитов унифицированными признаны:

• подсчёт в крови с помощью гематологического анализатора;
• подсчёт в мазках по методу Фонио.

Снижение количества тромбоцитов в анализе крови может быть истинным и тогда потребует немедленных действий согласно тяжести тромбоцитопении. Снижение количества тромбоцитов в анализе крови может не быть истинным. Тогда оно будет отражать индивидуальные особенности пациента или будет следствием ошибки на преаналитическом этапе.  Кроме  истинных тромбоцитопений возможно снижение количества  тромбоцитов, которое  обычно возникает из-за несвоевременного пропускания крови через анализатор, либо из-за  спонтанной агрегации тромбоцитов. Ложные снижения количества тромбоцитов могут встречаться при широком спектре нарушений, таких как аутоиммунные заболевания, вирусные и бактериальные инфекции, хронические воспалительные заболевания. Спонтанная агрегация тромбоцитов может быть проявлением таких факторов как иммунологический (антитромбоцитарные антитела), химический (антикоагулянты) и физический (температурный). Венозная кровь предпочтительнее для проведения общего анализа крови. На сегодняшний день в качестве антикоагулянта используют калийные соли этилендиаминтетрауксусной кислоты – ЭДТА (ethylene-diamine-tetra-acetic acid). ЭДТА-зависимая тромбоцитопения является следствием взаимодействия антитромбоцитарных антител с антигенами тромбоцитов в присутствии ЭДТА и при воздействии низких температур.  По данным зарубежных авторов на долю ЭДТА-зависимой псевдотромбоцитопении  приходится от 0,07-0,11% от всех анализов крови [3].  ЭДТА-зависимая псевдотромбоцитопения проявляется в уменьшении количества тромбоцитов, причем эти явления прогрессируют по мере увеличения времени, прошедшего после взятия крови. Чтобы избежать агрегации рекомендуется пропускать кровь через анализатор   в промежутке 0-5 мин. или через 1 час и более после взятия крови [4]. В промежутке 5 мин. — 1 час происходит временная агрегация тромбоцитов, что может привести к их ложному снижению в пробе крови. Непосредственно после взятия крови исключается возможность спонтанной агрегации тромбоцитов. 

Мы хотим продемонстрировать важность такой рутинной методики как подсчёт тромбоцитов по методу Фонио. А также двумя клиническими случаями подчеркнуть необходимость  для врача клинической лабораторной диагностики быть не только аналитиком , но и работать с микроскопом.

Первый клинический случай  привычен в амбулаторной практике.

Пациентка М., 1962 года рождения. Обратилась за справкой в бассейн в рамках ежегодной диспансеризации. На момент осмотра активно  жалоб не предъявляет. Общее состояние удовлетворительное. Температура тела 36.6°С. Сознание: ясное. Кожные покровы: розовые. Видимые слизистые розовые. Питание нормальное. Лимфоузлы: не увеличены. Щитовидная железа — не увеличена. Отеков нет. Костно-суставная система без патологии. Тоны звучные, ритм правильный. Патологические шумы не выслушиваются. ЧСС 68 в мин. САД 120/80 рт.ст. ДАД 120/80мм рт.ст Живот: не увеличен, участвует в дыхании, при пальпации мягкий, безболезненный. Печень не увеличена. Физиологические отправления в норме. Система мочевыделения:
Мочеиспускание не нарушено. Симптом поколачивания отрицательный с обеих сторон.

При выполнении общего анализа крови выявлено резкое снижение количества тромбоцитов – до 15х109/л.

ОБЩИЙ АНАЛИЗ КРОВИ №_________ Дата направления 5 февраля 2014 г. 12:59
Ф.,И.,О.М, 1962 г.р. Учреждение ФГБУ «Поликлиника №2»  Диагноз при направлении:K29.30	ист. бол. № 287 По поручению врача

Название параметра	Результат	Норма	Ед.
СОЭ по Панченкову	5	2 — 10	мм/ч
Гемоглобин (HGB)	145.00	130.0 — 160.0	г/л
Эритроциты ( RBC)	4.75	4.00 — 5.00	1012/л
Гематокрит (HCT)	40.6	40 — 48	%
(MCV) Ср.объем эритр.	85.5	80 — 103	fl
(MCH) Ср.сод.гем.в одном эритроците	30.5	26 — 34	pg
(МСНС) Ср.конц.гем.в одном эритроците	35.7	30 — 38	g/dl
Тромбоциты (PLT)	15	150 — 400	109/л
Лимфоциты (LYM)	35.7	5 — 55	%
Баз.,эоз.,моноциты (MXD)	5.1	1 — 20	%
Нейтрофилы (NEUT)	59.2	5 — 95	%
LYM#- абс.число лимфоцитов	2.1	0.8 — 2.7
MXD#- абс.число базоф.,эозин.,моноцитов	0.3	0.1 — 1.5
NEUT#- абс.число нейтрофилов	3.5	1.2 — 5.3
RDW-SD- распред. эритроц.по размеру	40.7	33.4 — 49.2
Отн.-е объема крупных тромб. (P-LCR)	47.7	13 — 43	%
Средний объем тромбоцита (MPV)	13.4	9 — 13	fl
RDW-CV- распред.эритроц. по размеру частиц	18.5	10.8 — 14.9
PDW(взвеш.распред.тромбоцитов)	24	9.8 — 18.0	%
Лейкоциты (WBC)	5.90	4.00 — 9.00	109/л
Палочко-ядерные (нейтрофилы)	3	1.00 — 6.00	%
Сегменто-ядерные (нейтрофилы)	59	47.00 — 72.00	%
Эозинофилы	1	0.50 — 5.00	%
Лимфоциты	34	19.00 — 37.00	%
Моноциты	3	3.00 — 11.00	%

Анализ  выполнялся на гематологическом анализаторе Сисмекс KX-21N ( Sysmex KX-21N ) производитель Roche Diagnostics (Швейцария). Препарат для микроскопии был приготовлен и окрашен на аппарате для автоматизированной окраски мазков крови Гематек (HemaTek) ,производитель Bayer Diagnostics. При подсчете лейкоформулы были обнаружены частые и большие  скопления тромбоцитов, что позволило предположить псевдотромбоцитопению. Пациентка была вызвана для повторного анализа крови. Был произведён забор крови и  приготовлены стекла для подсчёта тромбоцитов по Фонио. Унифицированный метод подсчёта в мазках крови (по Фонио) основан на подсчёте числа тромбоцитов в окрашенных мазках крови на 1000 эритроцитов с последующим расчётом на 1 мкл (или 1 л) крови, исходя из известного содержания в этом объеме количества эритроцитов [5].  Приготовленные, фиксированные и окрашенные препараты по Романовскому — Гимзе микроскопировали с иммерсионным объективом, подсчитывая количество тромбоцитов в тонких местах препарата, где эритроциты  расположены изолированно. В  каждом поле зрения  считали число эритроцитов и тромбоцитов, передвигая мазок  до тех пор, пока не были просчитаны 1000 эритроцитов. Затем произвели пересчёт по количеству эритроцитов, полученному с анализатора.

Ф.,И.,О. М, 1962 г.р. Учреждение ФГБУ «Поликлиника №2» Диагноз при направлении:K29.30

ист. бол. №287 По поручению врача

Название параметра	Результат	Норма	Ед.
СОЭ по Панченкову	5	2 — 10	мм/ч
Гемоглобин (HGB)	145.00	130.0 — 160.0	г/л
Эритроциты ( RBC)	4.7	4.00 — 5.00	1012/л
Гематокрит (HCT)	40.6	40 — 48	%
(MCV) Ср.объем эритр.	85.5	80 — 103	fl
(MCH) Ср.сод.гем.в одном эритроците	30.5	26 — 34	pg
(МСНС) Ср.конц.гем.в одном эритроците	35.7	30 — 38	g/dl
Тромбоциты (PLT)	225	150 — 400	109/л
Лимфоциты (LYM)	35.7	5 — 55	%
Баз.,эоз.,моноциты (MXD)	5.1	1 — 20	%
Нейтрофилы (NEUT)	59.2	5 — 95	%
LYM#- абс.число лимфоцитов	2.1	0.8 — 2.7
MXD#- абс.число базоф.,эозин.,моноцитов	0.3	0.1 — 1.5
NEUT#- абс.число нейтрофилов	3.5	1.2 — 5.3
RDW-SD- распред. эритроц.по размеру	40.7	33.4 — 49.2
Отн.-е объема крупных тромб. (P-LCR)	21.7	13 — 43	%
Средний объем тромбоцита (MPV)	9.4	9 — 13	fl
RDW-CV- распред.эритроц. по размеру частиц	12.5	10.8 — 14.9
PDW(взвеш.распред.тромбоцитов)	11.8	9.8 — 18.0	%
Лейкоциты (WBC)	5.90	4.00 — 9.00	109/л
Палочко-ядерные (нейтрофилы)	1,5	1.00 — 6.00	%
Сегменто-ядерные (нейтрофилы)	58	47.00 — 72.00	%
Эозинофилы	1	0.50 — 5.00	%
Лимфоциты	35	19.00 — 37.00	%
Моноциты	4,5	3.00 — 11.00	%

Нормальное количество тромбоцитов подтвердил и подсчёт по Фонио – 235х109/л.

Данная псевдотромбоцитопения не несла геморрагического риска или риска тромбообразования для пациента.

Следующий пример является иллюстрацией истинной тромбоцитопении, подлежащей, согласно стандарту ведения больных Американского общества гематологов,  госпитализации для внутривенного введения иммуноглобулина и глюкокортикостероидов [6].   

Пациент Л, 1991 года рождения. Обратился в поликлинику к дерматовенерологу по поводу геморрагических высыпаний и кровянистых выделений из носа. Самочувствие удовлетворительное. Из анамнеза стало известно, что после длительного пребывания на морозе, в течение двух часов при температуре -24 0С самостоятельно профилактически начал принимать Парацетамол+Фенилэфрин+Фенирамин+Аскорбиновую кислоту. За два дня до обращения  появились первые высыпания, на коже ног, которые в течение  последующих дней распространились по всему телу.
Хронические заболевания отрицает. Вредные привычки отрицает. Аллергоанамнез не отягощен.

Объективное состояние больного: Состояние относительно удовлетворительное. Температура тела  36,1 С.
Кожные покровы обычной окраски, геморрагические высыпания по типу множественных петехий размером 1-3 мм. на коже туловища, конечностей, слизистой полости рта. Отеков нет. Периферические лимфоузлы не увеличены. Зев умеренно гиперемирован, налётов нет.
Система органов дыхания: Над легкими перкуторно легочный звук, при аускультации дыхание везикулярное, хрипов нет. Чд 16 в 1 мин.
Сердечно-сосудистая система: Тоны сердца звучные, ритмичные. Пульс равен чсс — 82 в 1 мин. АД 110/70 мм.рт.ст. Система органов пищеварения:
Язык влажный, обложен белым налетом. Живот мягкий, болезненный в правом и левом подреберьях. Печень + 2 см, болезненная при пальпации. Селезенка увеличена. Стул в норме. Система мочевыделения:
Мочеиспускание не нарушено. Симптом поколачивания отрицательный с обеих сторон.

Основные данные лабораторного исследования:

Общий анализ крови, проведенный на анализаторе Сисмекс KX-21N ( Sysmex KX-21N ) производитель Roche Diagnostics (Швейцария) выявил лейкопению, относительный лимфоцитоз и полное отсутствие тромбоцитов.

Ф.,И.,О. Л, 05.11.1991 Учреждение ФГБУ «Поликлиника №2» Диагноз при направлении:L95.80

ист. бол. №8 По поручению врача

Название параметра	Результат	Норма	Ед.
СОЭ по Вестергрену	10	2 — 15	мм/ч
Гемоглобин (HGB)	138.00	130.0 — 160.0	г/л
Эритроциты ( RBC)	4.61	4.00 — 5.00	1012/л
Гематокрит (HCT)	*37.4	40 — 48	%
(MCV) Ср.объем эритр.	81.1	80 — 103	fl
(MCH) Ср.сод.гем.в одном эритроците	29.9	26 — 34	pg
(МСНС) Ср.конц.гем.в одном эритроците	36.9	30 — 38	g/dl
Тромбоциты (PLT)	*0	150 — 400	109/л
Лимфоциты (LYM)	*73.1	5 — 55	%
Баз.,эоз.,моноциты (MXD)	2.4	1 — 20	%
Нейтрофилы (NEUT)	24.5	5 — 95	%
LYM#- абс.число лимфоцитов	2.2	0.8 — 2.7
MXD#- абс.число базоф.,эозин.,моноцитов	0.1	0.1 — 1.5
NEUT#- абс.число нейтрофилов	*0.7	1.2 — 5.3
RDW-SD- распред. эритроц.по размеру	33.9	33.4 — 49.2
RDW-CV- распред.эритроц. по размеру частиц	12.2	10.8 — 14.9
Лейкоциты (WBC)	*3.00	4.00 — 9.00	109/л
Палочко-ядерные (нейтрофилы)	3	1.00 — 6.00	%
Сегменто-ядерные (нейтрофилы)	*18	47.00 — 72.00	%
Эозинофилы	5	0.50 — 5.00	%
Лимфоциты	*69	19.00 — 37.00	%
Моноциты	5	3.00 — 11.00	%

При подсчёте  тромбоцитов по методу Фонио их количество составило 4х109л.

На основании резко выраженной тромбоцитопении, клинической картины и анамнестических данных пациент был срочно госпитализирован в Центральную клиническую больницу УД ПРФ. Проведенные исследования крови и костного мозга выявили резко выраженные нарушения мегакариоцитопоэза и аутоиммунную природу тромбоцитопении. Был выставлен диагноз аутоиммунная тромбоцитопеническая пурпура.

Полагаем, что вышеизложенные примеры были полезны для повторения алгоритма проведения общего анализа крови и интерпретации  тромбоцитопений.

Если внутренний настрой  врача на то, что все тромбоцитопении являются ложными и не нуждаются в дополнительных исследованиях победит, то  жизнь следующего пациента окажется в опасности. Критические значения тромбоцитов должны быть среди других утвержденных в лаборатории критических лабораторных значений. И ответственность за них необходимо нести персонально врачу клинической лабораторной диагностики.

• Национальный Стандарт Российской Федерации Технологи лабораторные клинические. Обеспечение качества клинических лабораторных исследований ГОСТ Р 53079.3-2008  4.7.3

Nacional’nyj Standart Rossijskoj Federacii Tehnologi laboratornye klinicheskie. Obespechenie kachestva klinicheskih laboratornyh issledovanij GOST R 53079.3-2008  4.7.3

• Национальный Стандарт Российской Федерации Кровь донорская и ее компоненты. ГОСТ Р 53470-2009. 

Nacional’nyj Standart Rossijskoj Federacii Krov’ donorskaja i ee komponenty. GOST R 53470-2009

• Alan D.Michelson Platelets. Academic press.2012;989-1011.
• Методические рекомендации Гематологические анализаторы. Интерпретация анализа крови. 2007 .

Metodicheskie rekomendacii Gematologicheskie analizatory. Interpretacija analiza krovi. 2007 .

• Справочник. Лабораторные методы исследования в клинике. Под ред.В.В.Меньшикова. Медицина. 1987.

Spravochnik. Laboratornye metody issledovanija v klinike. Pod red.V.V.Men’shikova. Medicina. 1987.

• George J.N., Woolf S.H., Raskob G.E., Wasser J.S., Aledort L.M., Ballem P.J., et al. Idiopathic thrombocytopenic purpura: a practice guideline developed by explicit methods for the American Society of Hematology. Blood 1996;88:3—40.

1. Кулешова Светлана Вячеславовна, заведующая КДЛ ФГБУ «Поликлиника №2» УД П РФ , Москва, 119146, ул. 2-я Фрунзенская, д.4, (ассистент кафедры клинической лабораторной диагностики ФУВ РНИМУ им. Н.И.Пирогова) svkul@list.ru
2. Алтаева Александра Андреевна, канд.мед.наук, заведующая дерматовенерологическим кабинетом ФГБУ «Поликлиника №2» УД П РФ
3. Кузнецова Елена Алексеевна, врач КДО ФГБУ «Поликлиника №2» УД П РФ

Общий анализ крови включает исследование количественного состава клеток крови: эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов.

В лабораториях используют автоматические гематологические счетчики, но методы микроскопического анализа остаются наиболее информативными и точными. Один из таких методов – микроскопия мазка по Фонио для подсчета количества тромбоцитов.

Микроскопию мазка используют в тех случаях, когда результаты исследований автоматического подсчета гемоанализаторами значительно отклоняются от нормы.

Тромбоциты по Фонио подсчитываются по формуле, привязанной к значению абсолютного количества эритроцитов в крови.

Поэтому методика является частью общего исследования крови и выполняется после автоматического подсчета количества других клеток крови (эритроцитов).

Тромбоциты

Тромбоциты – безъядерные клетки, образуемые из мегакариоцитов костного мозга. После созревания и попадания в кровь клетка живет 5-7 суток. Старые клетки утилизируются печенью и селезенкой. Процесс старения у этих клеток особо выражен.

Тромбоциты, как и другие клетки крови, делятся на юные, зрелые и старые. В норме в крови содержится не менее 95% зрелых клеток. Выброс в кровь незрелых клеток может быть вызван фактором раздражения (множественные повреждения сосудов). В крови могут быть обнаружены и дегенеративные, старые клетки, что свидетельствует о патологии процесса созревания и утилизации.

Тромбоциты – главные участники процессов тромбообразования. Вместе с тем, выделяя особые ферменты, они стимулируют деление клеток и регенерацию тканей, регулируют уровень проницаемости мембран клеток, поддерживают эластичность стенок сосудов.

По их количеству можно определить состояние здоровья сердечно-сосудистой системы. Повышенное количество называют тромбоцитозом, пониженное – тромбоцитопенией.

Тромбоциты хорошо окрашиваются красителями. В зависимости от степени зрелости клетки окрашиваются с разной интенсивностью, что упрощает дифференциальную диагностику их морфологического состава.

Метод подсчета тромбоцитов по Фонио

Клетки подсчитывают разными способами. Камера Горяева и метод Фонио принципиально похожи и являются самыми распространенными. Суть метода Фонио заключается в параллельном подсчете окрашенных клеток эритроцитов и тромбоцитов в полях сетки микроскопа. В камере Горяева эта сетка нанесена лазером на само стекло.

Подсчет тромбоцитов по Фонио выполняют с использованием недорогих реактивов:

• В качестве коагулянта применяют 14% раствор сульфата магния или 6% раствор этилендиаминтетраацетата натрия (ЭДТА),
• Для фиксации мазка используют раствор Лейшмана (раствор эозин-метиленовой синьки в метаноле).
• Эозиновый краситель Гимзы для окраски по Романовскому.

Метод подсчета тромбоцитов по методу Фонио популярен не только из-за простоты и низкой себестоимости. В отличие от подсчета тромбоцитов в камере Горяева микроскопию мазка по Фонио можно выполнить через несколько часов или дней после сдачи анализа. Лабораториям, заваленным текущими заявками, это позволяет снизить пиковые нагрузки, связанные с утренними наплывами пациентов.

Кроме того, возможность повторной микроскопии через несколько дней позволит сравнить показания или уточнить результат подсчета.

Выполнение анализа

Для анализа используется капиллярная кровь (из пучки пальца).

После прокола пучки первая капля не используется, ее удаляют ваткой. Для мазка берут вторую каплю. Обычно коагулянт добавляют в выступившую каплю крови и сразу помещают образец на стекло. Но лаборант может смешивать кровь с коагулянтом в пробирке.

Мазки фиксируются и окрашиваются методом Паппенгейма. При нанесении на приготовленный мазок крови нескольких капель раствора фиксатора клетки приклеиваются к стеклу. Гематологические фиксаторы способны прокрашивать клетки, что ускоряет процесс подготовки мазка.

Затем на мазок наносят несколько капель краски Гимзы-Романовского и выдерживают 2-3 ч. (с использованием магнезии) или 30-45 мин. (с использованием в качестве коагулянта ЭТА). В результате клетки крови окрашиваются и хорошо просматриваются для ручного подсчета.

После промывания мазок высушивают в сушильном шкафу и приступают к исследованию при помощи микроскопа, оснащенного иммерсионным объективом и сегментированными окулярами.

Подсчет тромбоцитов

Сетка, нанесенная на окуляры, облегчает подсчет тромбоцитов в мазке крови. Лаборант считает число клеточных элементов по секторам этой сетки.

Параллельный подсчет количества эритроцитов и тромбоцитов начинают с одного сектора, и, передвигая окуляр, переходят к следующему сектору. Подсчет заканчивают, когда число эритроцитов достигнет 1000.

Важно! Погрешность метода обусловлена тем, что при подсчете учитывают только скопления этих клеток. Отдельно расположенные одиночные клетки не учитывают.

После того как получено число тромбоцитов, привязанное к 1000 клеток эритроцитов, приступают к вычислению абсолютного количества клеток в единице объема крови. Для этого понадобится значение абсолютного количества эритроцитов крови данного пациента, полученное в автоматическом анализаторе.

Расчет выполняют по такой формуле: значение абсолютного количества эритроцитов делят на 1000 и умножают на число подсчитанных при микроскопии тромбоцитов:

где T – число подсчитанных тромбоцитов, E – абсолютное число эритроцитов.

Достоверность результатов

Низкое качество оборудования и нечеткое следование методике исследования может повлиять на достоверность результата. Причины получения искаженных данных:

• Использование некачественных химикатов,
• Неправильная подготовка растворов,
• Несоблюдение сроков окрашивания,
• Неправильный режим сушильной камеры.

В условиях массового выполнения микроскопии особое значение имеет правильная организация работы, маркировка и хранение образцов.

Получение объективных результатов зависит не только от правильного выполнения всех требований методики лаборантом, но и от самого пациента. Он должен ответственно подойти к процедуре обследования и подготовиться к сдаче анализа:

• Забор крови выполняют на голодный желудок, поэтому пациент должен отказаться от приема пищи за 8 часов до визита в лабораторию.
• Если образ жизни пациента или условия его работы связаны с постоянными физическими нагрузками, рекомендуется за 2 дня до анализа их ограничить.
• Любители алкоголя должны помнить, что прием этилового спирта провоцирует многократный подъем тромбоцитов.
• Эмоциональные стрессы тоже негативно сказываются на картине крови, поэтому несколько дней в преддверии сдачи анализов нужно провести в спокойной обстановке.

Описания некоторых лекарств (гепарин, простагландин, аденозин) содержат информацию о том, что препарат временно может влиять на состав крови. Пациент обязательно должен поставить врача в известность о любых принимаемых препаратах. Врач оценит вероятность искажения результатов анализа и примет взвешенное решение о временной отмене этого средства.

Расшифровка результатов, причины отклонений

В стандартном лабораторном бланке тромбоциты обозначаются PLT. Единица, в которой представлены результаты, – тысячи единиц на микролитр. Обычно в лабораторных бланках для сравнения указана и норма.

Норма содержания в крови тромбоцитов для мужчин отличается от нормы для женщин. Она зависит и от возраста человека.

• Норма для мужчин – 200–400 тыс./микролитр,
• Для женщин – от 180 до 320 тыс./ микролитр.

Норма для детей:

• У новорожденных до 2 недель – от 100 до 420 тыс./ микролитр,
• У малышей до года – от 150 до 350 тыс./ микролитр,
• У детей до 5 лет – 180-380 тыс./ микролитр,
• У детей до 7 лет – от 180 до 150 тыс./ микролитр.

В период менструации отмечается нормальное (физиологическое) понижение клеток (75-200 тыс./мкл). Двукратное сокращение количества тромбоцитов связано с необходимостью отторжения эпителия матки. Снижение тромбоцитов у беременных (100-300 тыс./мкл) тоже считается нормальным.

Во время менструации сдавать анализ на тромбоциты не рекомендуется.

Высокие тромбоциты

Тромбоцитоз, вызванный патологией стволовых клеток в костном мозге, называют первичным.

Физиологическое повышение тромбоцитов как реакцию организма на травму, употребление алкоголя, инфекцию или отравление называют вторичной. Механизм такой реакции связан с усиленным выбросом тромбопоэтина, который стимулирует деление и рост тромбоцитов в костном мозге.

Тромбоцитоз может возникнуть в результате таких заболеваний:

• Туберкулез,
• Миелолейкоз,
• Анемия,
• Артрит,
• Эритроцитоз,
• Лимфогранулематоз,
• Острые инфекции,
• Рак печени, почек.

Отравление, стресс и интенсивная физическая нагрузка способны вызвать увеличение количества тромбоцитов.

Важно! При обильных кровопотерях на фоне уменьшения объема крови уровень тромбоцитов снижается только в первые часы, а через несколько часов уровень может повыситься в несколько раз.

Низкие тромбоциты

Причиной тромбоцитопении зачастую становится бесконтрольное самолечение препаратами, побочным эффектом которых и становится развитие тромбоцитопении.

Причиной тромбоцитопении могут быть такие заболевания:

• Болезни печени (гепатит, цирроз),
• Нарушение функции щитовидной железы (гипертиреоз, гипотиреоз),
• Отдельные виды лейкоза,
• Мегалобластная анемия,
• Алкоголизм.

При затяжной тромбоцитопении стенки сосудов становятся хрупкими, незначительные порезы и повреждения сосудов приводят к длительному кровотечению.

Для уточнения причины низких тромбоцитов и назначения терапии пациенту придется пройти множество дополнительных обследований (УЗИ печени, селезенки, тест на антитела, МРТ). Анализ крови на число тромбоцитов по Фонио нужно будет сдавать регулярно.

Как нормализовать показатели тромбоцитов

Когда тромбоциты понижены, врач назначает медикаментозную терапию. Но пациент может сделать процесс лечения эффективнее:

• Снизить потребление соли, алкоголя, исключить из рациона морскую капусту, красные сорта винограда,
• Включить в ежедневный рацион рыбу, печень, гречку, орехи, яблоки, сельдерей, сладкий перец.
• Не принимать лекарства, которые вызывают тромбоцитопению (антибиотики, антидепрессанты).
• Принимать синтетические витаминные комплексы, включающие витамины группы А, В, С.

При высоких показателях снизить уровень тромбоцитов можно при помощи нормализации образа жизни, уменьшения стрессов, травм. Из медикаментов снизить тромбоциты поможет ацетилсалициловая кислота. Дозы препарата назначает только врач.

Нужно внести коррективы в свой рацион:

• Исключить шиповник, гранат, бананы, манго,
• Употреблять продукты, содержащие ацетилсалициловую, яблочную или лимонную кислоту и разжижающие кровь (клюква, свекла, облепиха, томаты, зеленый чай),
• Контролировать объем употребляемой жидкости, так как обезвоживание приводит к повышению вязкости крови.

Эти меры помогают нормализовать уровень тромбоцитов, нарушения которого носят вторичный (реактивный) характер. Первичные тромбоцитопении и тромбоцитозы подлежат длительной диагностике и терапии.

Загрузка…

Подсчет тромбоцитов по Фонио: суть анализа, нормы у взрослых и детей

Вы здесь:

Анализ тромбоцитов по Фонио — это распространенный метод микроскопического исследования, позволяющий получить наиболее информативные и точные данные.

Рассмотри в чем суть этого анализа, как он проводится, какие преимущества и недостатки у него существуют и каковы нормальные показатели.

Роль тромбоцитов

• Тромбоциты — это самые мелкие безъядерные элементы крови сферической формы, образующиеся в процессе синтеза из крупных клеток (мегакариоцитов) костного мозга.
• Они играют важнейшую роль в механизмах первичного и вторичного гемостаза, при повреждении сосудов.
• Тромбоциты стоят на первой линии обороны при возникновении кровотечений.
• Более того, они являются источником ферментов (факторов регенерации и роста), которые способствуют следующим процессам:

• стимулируют клеточный синтез;
• регенерируют ткани;
• содействуют эластичности стенок артерий;
• участвуют в регуляции уровня проницаемости клеточных мембран.

Как и лейкоциты, тромбоциты имеют свой цикл жизнедеятельности (не более 7 дней) и деление по фазе созревания — молодые, зрелые, старые. Однако процесс старения у них выражен наиболее ярко.

В норме у здорового человека уровень зрелых клеток должен колебаться в пределах 95%.

Отклонения от нормы указывают на следующее:

• высокая концентрация молодых клеток — развитие многочисленных нарушений в кровеносной системе;
• присутствие в крови дегенеративных (старых) клеток — дестабилизация производства и переработки кровяных телец.

По количеству тромбоцитов можно определить состояние свертывающей системы человека. Превышение нормы носит название тромбоцитоз, понижение — тромбоцитопения.

В чем заключается метод фонио?

Метод Фонио — это анализ крови из пальца на основе микроскопии мазка. Количество тромбоцитов высчитывается по формуле относительных отклонений от абсолютного суммарного значения эритроцитов.

Анализ проводят без ограничений по возрасту или половому признаку, поэтому он разрешен даже для новорожденных и беременных женщин.

Суть методики — точный подсчет пониженного или повышенного числа тромбоцитов, позволяющий заранее выявить развитие патологий различного происхождения. Результаты метода используют для коррекции терапевтического лечения.

Преимущества и недостатки

Сегодня существует много других, даже более технологичных, исследований. Однако в большинстве случаев врачи прибегают именно к методу Фонио, который имеет ряд существенных преимуществ.

Таблица с указанием плюсов метода:

Плюсы	Описание
Точность и простота формулы вычисления на уровень содержания тромбоцитов	Подсчет производится по количеству окрашенных эритроцитов в соотношении 1 тыс. эритроцитов на 1 мкл (или мл) крови.
Четкая видимость исследуемого материала	Под микроскопом просматривается не только число элементов, но также форма, цвет или деструкции (агрегации) элементов.
Не требует срочных действий	Лабораторные исследования можно провести в любое время (через несколько часов и даже суток после сдачи анализа).
Возможность повторной микроскопии	Проводят для сравнения показателей или уточнения результатов.
Низкая себестоимость	Не требует редких дорогостоящих компонентов.
Высокая скорость исследований	Обычная лаборатория выдает результаты в течение 2 часов, с оборудованием последнего поколения — в течение 30 минут.

Единственным недостатком метода считается плохое качество мазка или неравномерность распределения кровяных клеток по лабораторному стеклу, в результате чего иногда отмечаются большие погрешности.

На достоверность результатов может повлиять и неграмотность или халатность лаборанта, а также оборудование для исследований низкого качества.

Подготовка к процедуре

Помимо этого, чтобы получить достоверные данные подсчета тромбоцитов по методу Фонио, пациенту необходимо соблюдать простые правила подготовки к сдаче крови:

• В течение 3 дней необходимо воздержание от спиртного, жирного, жареного.
• Сдавать кровь нужно натощак, с последнего приема пищи и жидкости должно пройти не менее 8 часов.
• Накануне вечером необходимо отказаться от любых физических нагрузок.
• На забор крови пациент приходит в утренние часы в строго установленное время.

При получении сомнительного результата анализ проводится 2-3 раза с интервалом не более 5 суток.

Как производится подсчет?

Для определения тромбоцитарного индекса используют следующие реактивы:

• магния сульфат — стерильный 14%-й раствор;
• пигмент Романовского-Гимзы (красящее вещество);
• фиксатор (Лейшмана или Май-Грюнвальда).

Процесс проведения:

1. Палец вытирается насухо, прокалывается.
2. На место прокола наносится капля раствора сульфата магния для смешивания с кровью.
3. Из кровяной смеси делают мазки, которые сушат и окрашивают.

1. Подсчет тромбоцитов проводится по формуле: У = А х В/1000.
2. Где А — абсолютное значение эритроцитов, В — количество тромбоцитов.
3. Схема расчета следующая:

1. В мазке вычисляют 1000 эритроцитов + выявленные тромбоциты.
2. Для получения абсолютного значения полученная величина умножается на количество эритроцитов на 1 мкл и делится на 1000.
3. Полученная сумма выражается в промилле.

Нормальные значения

Количество тромбоцитов во многом зависит от возраста и факторов, влияющих на изменение объема крови.

У грудничков диапазон значений довольно широкий, так как он определяется по общему состоянию ребенка. Относительно стабильными показатели становятся после 4 лет.

У представительниц слабого пола на показатели влияет то, на какой день и даже в какое время суток наступает менструальный цикл. От него зависит скорость выработки тромбоцитов.

Во время беременности и в период менструации показатели могут снижаться до 150 тыс/мкл, что считается нормой.  Однако значение ниже этого уровня или постоянно сниженные показатели могут свидетельствовать о патологическом состоянии.

У мужчин процесс обновления клеток происходит с постоянной регулярностью. В связи с чем нижняя граница нормы у них выше, чем у женщин.

Нормальные значения у взрослых указаны в этой таблице:

Половой признак	Цифра, тыс/мкл
У мужчин	180-320
У женщин	150-320
У беременных	150-380

У детей показатели будут следующими:

Возраст	Цифра, тыс/мкл
Новорожденные до 2 месяцев	100-420
Груднички от 2 мес до 1 года	120-350
Малыши от 1 до 4 лет	180-320
Подростки 10-15 лет	180-450
Ювенильный период 15-18 лет	180-420

Почему они могут быть понижены или повышены?

При отклонениях от нормы назначают повторный анализ. Если результаты подтверждаются неоднократно, то это говорит о развитии патологии.

Превышение нормы (тромбоцитоз или тромбофилия) происходит на фоне следующих деструктивных состояний:

• нарушение работы костного мозга;
• менингококковая инфекция;
• наличие в организме воспалительного процесса;
• некроз в тканях;
• развитие онкологии (лимфогранулематоз, миелолейкоз);
• прием медикаментозных средств;
• после удаления селезенки;
• серьезные кровопотери после открытой травмы или хирургической операции (стентирование, коронарное шунтирование);
• дисфункция работы печени или почек (эритроцитоз, рак);
• туберкулез или пневмония;
• хронические заболевания кроветворной системы;
• общие факторы — физические перегрузки, обезвоживание, отравление, стрессы.

Если тромбоциты повышены у женщины в период беременности, то это опасное состояние, угрожающее серьезными осложнениями:

• токсикоз ярко выраженной формы;
• выкидыш (произвольное прерывание беременности);
• задержка развития у плода;
• варикозное расширение вен;
• тромбоз (или тромбофлебит) нижних конечностей;
• тромбоэмболия (закупорка кровеносного сосуда мозга, сердца, легочной артерии и т. д.), на фоне которой развиваются инфаркты, инсульты и даже гангрены.

Низкие показатели или тромбоцитопения часто наблюдается у недоношенных малышей. Подобные аномалии обычно возникают на фоне недоразвития органов или систем.

Факторы, способствующие снижению тромбоцитов у новорожденных:

• инфицирование плода внутри утробы;
• несовместимость группы крови у матери и плода;
• асфиксия во время родов;
• наследственная анемия.

Причины понижения тромбоцитов у взрослых людей и детей старше 4 лет:

• облучение (радиация);
• интоксикация ядами или химией (свинцом);
• болезни крови;
• злокачественная онкология;
• аллергии сложного типа;
• коллагенозы;
• заболевания печени (цирроз, гепатит);
• после гемодиализа;
• дисфункции щитовидной железы;
• инфекции различной этиологии;
• аутоиммунные патологии;
• обильные кровопотери;
• хронический нефрит;
• алкоголизм;
• наследственность.

Недостаток тромбоцитов часто сопровождается следующими симптомами:

• частые кровотечения из носа;
• подкожные и внутренние геморрагии;
• петехии (точечные геморрагии);
• обширные гематомы или кровоподтеки;
• обильная менструация, которая длится больше обычного.

Для установки точного диагноза требуется дополнительное инструментальное обследование, а также посещение врачей узкого профиля.

Как привести уровень тромбоцитов в норму?

Основной метод нормализации уровня содержания тромбоцитов — провести лечение заболевания, которое явилось причиной отклонений.

Пониженный уровень повышают при помощи:

• приема препаратов, стимулирующих выработку телец;
• приема витаминов (К, В12, фолиевую кислоту, железо);
• применения народных средств — крапива в любом виде (отвар, сок, настой), кунжутное масло, настойка вербены.

При недостатке тромбоцитов рекомендуется соблюдать лечебную диету.

Нужно исключить из рациона:

• лук, чеснок, острые специи, имбирь;
• маринады и соленья;
• жирную рыбу;
• темный виноград.

И включить в ежедневное меню:

• каши (греча, рис, чечевица);
• крольчатину, индейку;
• говяжий язык, сердце, печень;
• орехи, зелень, зеленый чай.

При повышенных показателях рекомендуется выполнение следующих пунктов:

• прием препаратов, включающих ацетилсалициловую кислоту;
• пропить витаминный комплекс на основе магния;
• исключить — шиповник, бананы, манго, гранат;
• включить в рацион — клюкву, облепиху, свеклу, томаты;
• потреблять достаточное количество жидкости.

При отклонении в ту или другую сторону рекомендуется отказаться от алкоголя (временно), избегать стрессов и физических перегрузок, заниматься лечебной физкультурой.

Автор статьи: Дмитриева Юлия (Сыч) — В 2014 году с отличием окончила Саратовский государственный медицинский университет имени В. И. Разумовского. В настоящее время работает врачом-кардиологом 8 СГКБ в 1 к/о. Оцените пользу статьи: (1

Тромбоциты по Фонио

Тромбоциты по Фонио – это наиболее распространенный и достоверный способ подсчета количества маленьких кровяных пластинок, которые образуются в костном мозге. Особенностью такого теста является то, что форменные элементы крови учитываются не в жидком виде, а в окрашенном мазке.

• Такой анализ не имеет ограничений по половой принадлежности и возрастной категории, отчего является разрешенным для детей и представительниц женского пола в период беременности.
• Для получения наиболее достоверной информации необходимо соблюдение нескольких несложных правил подготовки, о которых гематолог заранее предупреждает каждого больного.
• Необходимость осуществления такого лабораторного теста заключается не только в том, чтобы выявить повышенное или пониженное содержание тромбоцитов в крови, но также для контроля над эффективностью терапии.

В настоящее время существует несколько методик подсчета уровня тромбоцитов: люминесцентная микроскопия, использование электронно-автоматических счетчиков, применение камеры Грязева. Однако в подавляющем большинстве случаев применяется именно метод по Фонио.

Положительные стороны такого исследования:

• высокая точность – достигается благодаря использованию специальной формы расчета, компоненты которой легко обнаруживаются в капле крови;
• быстрота осуществления – промежуток времени с момента забора биологического материала и до получения результатов составляет не более 2 часов, а с применением новейшего высокоточного оборудования вся процедура занимает не более получаса;
• отсутствие необходимости в дорогостоящих реактивах – для активации тромбоцитов достаточно введения коагулянтов, а также проводится подкрашивание мазка специальным раствором.

Именно такие факторы дают возможность получить более точную информацию, нежели при общеклиническом анализе крови или коагулограмме.

Кроме этого, подсчет тромбоцитов по Фонио обладает следующими особенностями:

• хорошая визуализация клеточных элементов;
• изучение биологического материала может быть проведено в любое время, а не сразу же после получения крови;
• вычисление уровня мелких кровяных пластинок облегчено их «привязкой» к 1000 эритроцитов на 1 миллилитр крови.

1. Однако подобная методика может иметь погрешности, которые связаны с плохим качеством мазка или неравномерным распределением тромбоцитов по специальному стеклу.
2. Специалисты из области гематологии, занимающиеся расшифровкой результатов, выделяют несколько основных факторов, которые могут очень сильно повлиять как на качество, так и на исход анализа.
3. Прежде всего, необходимо отметить, что существует специфическая подготовка к подобному лабораторному тесту:

• Кровь не берется у пациента, находящегося в состоянии алкогольного опьянения, поскольку на этом фоне норма тромбоцитов повышается в 3-4 раза.
• Исследование не осуществляется при сильной физической усталости человека, а также в случае длительного влияния стрессовых ситуаций. Такие расстройства могут вызвать чрезмерную выработку форменных элементов, что является исключительно временным явлением и не несет в себе никакой информации о реальном положении вещей.
• Анализ выполняют на голодный желудок.
• За неделю до посещения врача необходимо полностью отказаться от приема каких-либо медикаментов. Если по каким-либо причинам сделать это невозможно, то следует проинформировать об этом клинициста.

Оптимальным временем для взятия образца являются утренние часы, а именно: с 7 до 9 утра.

Второе условие, влияющее на результат – качество реактивов. При применении некачественных веществ будут получены ложноположительные отклонения от нормы. В таких ситуациях человеку необходимо сдавать тест трижды, с промежутком в 2-3 суток. Это даст возможность свести к минимуму любые погрешности.

Помимо этого, учитываются особые состояния организма, а именно:

• протекание менструации;
• период вынашивания ребенка;
• грудное вскармливание;
• сильнейшая физическая нагрузка.

Именно такие обстоятельства приводят к тому, что результативность методики по Фонио значительно понижается.

Подсчет тромбоцитов по методу Фонио предусматривает окрашивание мазка крови специальным красителем. Подобные форменные элементы крови рассчитываются на 1000 эритроцитов, после чего переводятся в соотношение на 1 литр крови.

Реактивами, применяемыми во время такого теста, выступают:

• сульфат магния 14% раствор;
• краситель Романовского-Гимзы;
• фиксаторы Лейшмана и Май-Грюнвальда.

Перед тем как нанести то или иное вещество на кожный покров пациента, необходимо его предварительно обработать. Для забора крови из пальца делается небольшой прокол. При изучении не используется первая капля крови.

После этого наносится небольшая капля раствора одного из вышеуказанных веществ и осторожно смешивается. Из получившегося соединения делают мазок для последующего изучения.

Стоит отметить, что кровь высушивается и окрашивается по методу Паппенгейма.

Далее предметное стекло помещают под микроскоп и снижают количество красных кровяных телец до тысячи. Во внимание берутся только близлежащие клетки, формирующие между собой группы. Единичные включения не имеют никакой ценности при таком исследовании.

После получения необходимого уровня эритроцитов параметры тромбоцитов рассчитывают по следующей формуле – Х=АхВ, а полученное число делят на 1000, где:

• Х – это искомое количество тромбоцитов;
• А – число кровяных пластинок в мазке на тысячу эритроцитов;
• В – концентрация красных кровяных телец в литре крови;
• 1000 – показатель эритроцитов в исследуемом мазке.

Второй вариант действий лаборанта заключается в том, что в пробирку с капиллярной кровью вносят определенное количество магнезии или ЭДТА, тщательно перемешивают и готовят мазок. Затем смесь высушивается и окрашивается одним из вышеуказанных красителей. Формула расчета остается неизменной.

Именно такими способами определяется норма тромбоцитов как у взрослого человека, так и у ребенка.

Тромбоциты по Фонио норма будет немного отличаться в зависимости от влияния нескольких факторов, а именно: половой принадлежности и возрастной категории человека.

Установленный допустимый уровень описываемого компонента крови на 1 куб. миллиметр крови варьируется от 120 до 400 тысяч.

Варианты нормы:

Возраст	Количество тромбоцитов (тыс.)
Новорожденные	100-420
Дети старше года	180-320
Мужчины	180-400
Женщины	180-340

Как повышенные, так и пониженные значения укажут специалисту на то, что в организме человека протекает тот или иной патологический процесс.

Если тромбоциты по Фонио снижены, то это в подавляющем большинстве случаев указывает на наличие следующих патологий:

• лучевая болезнь;
• острое отравление химическими веществами или ядами;
• коллагеноз;
• патологии кроветворной системы;
• злокачественные новообразования любой локализации;
• малокровие;
• поражение печени;
• различные аллергические реакции;
• обильные кровопотери;
• инфекционные недуги;
• передозировка медикаментами;
• хронический алкоголизм.

Когда анализ показал возрастание подобного элемента, то наиболее часто это указывает на:

• внутреннее кровотечение;
• удаление селезенки;
• дефицит железа;
• бактериальные, вирусные и паразитарные болезни;
• хронические патологии со стороны системы кроветворения;
• аутоиммунные заболевания;
• туберкулез и пневмонию;
• обезвоживание.

• Для установления окончательного результата потребуются дополнительные лабораторные тесты, инструментальные процедуры и консультации клиницистов из различных областей медицины.
• Повышенные и пониженные тромбоциты по Фонио требуют коррекции, что основывается на ликвидации базового заболевания или предрасполагающего фактора, не имеющего отношения к протеканию какого-либо недуга, например, алкоголизм или передозировка медикаментами.
• Для восстановления нормального уровня необходимо:

• принимать лекарственные препараты с обязательным контролем суточной нормы и длительности приема;
• использовать рецепты народной медицины – показано только после одобрения лечащего врача;
• соблюдать определенные правила питания;
• полностью отказаться от вредных привычек.

В любом случае терапия будет носить индивидуальный подход. Однако полный отказ от квалифицированной помощи влечет за собой развитие осложнений, которые иногда несут угрозу для жизни человека.

Подсчет тромбоцитов по Фонио: суть метода, плюсы и минусы

Тромбоциты образуются в красном костном мозге, их предшественниками являются мегакариоциты. В сердечно-сосудистой системе клетки выполняют следующие функции:

• образование сгустка, который перекрывает места повреждения сосудов;
• участие в свертывающей системе, ускорение процесса;
• выделение веществ, способствующих заживлению тканей благодаря стимуляции деления клеток.

Тромбоциты находятся в крови в неактивной форме. Как только происходит повреждение, они активируются. Клетки меняют форму с плоской на шаровидную. Образуются выросты на поверхности.

С помощью них осуществляется слипание с другими тромбоцитами. Образовавшийся конгломерат прилипает к поврежденной стенке сосуда. Образование выделяет фибриноген.

Он представлен в виде нитей, которые укрепляют тромбоцитарный конгломерат.

Количество тромбоцитов в крови должно быть сбалансированным. Если их становится мало, возникает риск внезапного кровотечения. Они образуются даже при незначительных повреждениях и ушибах. Если кровяных пластинок появляется чрезмерно много, повышается риск тромбоза. Это приводит к закупорке мелких и крупных сосудов, некрозу (омертвлению) органов.

Тромбоцитопения — уменьшение количества тромбоцитов в крови. Тромбоцитоз — увеличение числа кровяных пластинок. Оба состояния требуют терапии и периодического подсчета клеток с помощью различных методов в лаборатории.

Суть метода Фонио для подсчета тромбоцитов

Для проведения обследования пациенту необходимо сдать кровь. Врачи советуют использовать биологическую жидкость, взятую из пальца. Медицинский работник делает из него мазок. Он фиксируется красителями, чтобы устранить дальнейшие реакции и прокрасить клетки для микроскопа. Узнай, откуда лучше брать кровь — из пальца или вены.

Врач подсчитывает общее число тромбоцитов и эритроцитов в мазке. Полученные значения подставляют в формулу. Осуществляется пересчет 1 мкл биологической жидкости, полученной для мазка, на 1 л крови.

Преимущества и недостатки метода Фонио

Несмотря на то, что существует множество методик подсчета тромбоцитов, врачи-лаборанты используют анализ подсчета тромбоцитов по Фонио.

Методика имеет следующие преимущества:

• исследование является точным и простым;
• просматривание всех форменных элементов крови, возможность обнаружении дефектных клеток;
• фиксируемый мазок не изменяется, поэтому у врача появляется время в запасе для внимательного просмотра;
• если пациент или лечащий врач сомневается в диагнозе, лаборант может повторно просмотреть сохранившийся мазок;
• низкая стоимость реактивов, позволяющая экономить финансы клинических учреждений, проводить множество исследований;
• быстрая выдача результатов.

К негативным сторонам относится врачебная ошибка. Медицинский персонал может допустить следующие ошибки:

• помещение на предметное стекло первой капли крови, которую по правилам необходимо стирать ватой;
• плохое прокрашивание мазка (использование большого количества краски, применение просроченных реактивов, неправильное время для фиксации), которое приводит к отсутствию изображения под микроскопом;
• ошибка лаборанта в подсчете клеток.

Что влияет на качество исследования

На качество исследования влияет множество факторов. Должен правильно осуществляться подготовительный этап, сбор биоматериала, проведение исследования. Любая приводит к получению измененных данных.

• Правильная подготовка к исследованию, о которой предупреждает врач пациента.
• Сбор биоматериала в утренние часы. В это время на организм не повлияли физические нагрузки и употребляемая пища.
• Правильная методика сбора крови, нанесение ее на предметное стекло.
• Фиксация материала с помощью реактивов, которые имеют нормальный срок годности. Они должны быть качественными, чтобы врач-лаборант смог рассмотреть прокрашенные клетки.
• Правильное распознание клеток. Знания об отличии форменных элементов крови друг от друга.
• Использование формулы для пересчета клеток с 1 мкл на 1 л крови.

Подготовка к сдаче анализа крови на тромбоциты

Для получения корректных данных пациенты должны подготовиться к проведению исследования и сдачи крови. Нарушение правил может привести к постановке ошибочного диагноза.

• За 3 дня до исследования рекомендуется соблюдать диету. Не есть жирное, жареное, острое, соленое. Переизбыток этих продуктов приведет к временному изменению состава крови.
• Отсутствие активных физических нагрузок, которые напрямую влияют на количество кровяных пластинок. Возможно применение легких упражнений, которые за 1 сутки до тестирования должны отсутствовать.
• Биологическую жидкость для исследования сдают сразу после сна на голодный желудок. Последний прием пищи — за 8 часов до тестирования.
• Для устранения риска врачебной ошибки терапевты и лаборанты советуют проводить анализ 2 раза с интервалом в несколько дней. Если данные идентичны, или разнятся незначительно, подсчет тромбоцитов осуществился правильно.

Подсчет тромбоцитов по Фонио: описание методики

Описание подсчета тромбоцитов по Фонио начинается со взятия крови из капилляра пальца. Биологическую жидкость помещают в капилляр. Образец отправляют в лабораторию для фиксации содержимого.

Важно! Первую каплю снимают ватой, в ней содержится максимальное количество форменных элементов крови. Если провести исследование по ней, будет поставлен ошибочный тромбоцитоз.

Для окрашивания применяют один из следующих реагентов:

• раствор ЭДТА 2,6%;
• раствор сульфата магния 14%.

В капилляр помещают 75 мкл выбранного химического вещества. Добавляют биологическую жидкость до максимальной отметки. Используемые жидкости должны перемешаться.

Из капилляра полученную жидкость добавляют на предметное стекло, размазывают пластиковым шпателем. Мазок окрашивают по правилам метода Романовского-Гимза.

Внимание! От того, какой реактив применяется в лаборатории зависит время фиксации клеток. Для ЭДТА оно составляет 40 минут, для сульфата магния — до 3 часов.

Полученный мазок помещают под микроскоп. Фокусируют изображение. Врач-лаборант подсчитывает количество эритроцитов и тромбоцитов до получения значения, равного 1000. Чтобы повторно не посчитать каждую клетку, микроскоп перемещается слева направо, вниз, справа налево. Движение осуществляют до конца мазка или подсчета итогового количества клеток.

Число эритроцитов и тромбоцитов перемножают, делят на 1 тысячу. С помощью данной формулы помучается значение кровяных пластинок на 1 л крови.

Норма тромбоцитов у женщин, мужчин и детей

Норма кровяных пластинок разнится, в зависимости от возраста. Сразу после рождения показатель постоянно меняется, стабилизируется он к 3 годам. Количество показателя у женщины меняется в зависимости от фазы менструального цикла. Во время маточного кровотечения число тромбоцитов резко снижается для того, чтобы кровь беспрепятственно выходила наружу.

У беременных женщин показатель снижен, это необходимо для нормального развития плаценты и снижения риска тромбоза.

Для мужчин характерно установление показателя примерно на одном уровне, он редко колеблется. Это происходит из-за того, что у мужчин постоянно обновляется кровь, отсутствует кровотечение.

Таблица нормального показателя для детей.

Возраст	Количество кровяных пластинок, тыс/мкл
Дети после рождения и до 3 месяцев	120-450
Дети от 3 месяцев и до 1 года	100-360
Дети от 1 до 5 лет	150-350
От 6 до 15 лет	180-400
От 16 до 20 лет	180-450

Таблица нормальных значений показателя у взрослых, в зависимости от пола.

Пол	Количество показателя, тыс/мкл
Мужчины	180-380
Женщина	140-380
Беременная женщина	140-320

О чем говорят низкие показатели

Тромбоцитопения появляется у людей при следующих состояниях и заболеваниях:

• продолжительное воздействие облучения или появления лучевой болезни;
• отравление тяжелыми металлами или другими химическими веществами;
• нарушение продукции мегакариоцитов в красном костном мозге при заболеваниях;
• врожденное заболевание, сопровождающееся снижением количества кровяных пластинок;
• коллагенозы – поражение соединительной ткани в различных отделах организма (суставы, сосуды);
• воспалительное состояние печени, переходяще в хроническую форму.

У пациентов с тромбоцитопенией возникает внутреннее кровотечение даже при незначительных ударах и травмах. Постоянно образуются кровоподтеки. Эластичность сосудов снижена, поэтому форменные элементы крови беспрепятственно проникают в наружные ткани. На коже образуются звездочки или красные пятна.

О чем говорят высокие показатели

Тромбоцитоз появляется при следующих состояниях и заболеваниях:

• употребление лекарственных веществ, влияющих на продукцию форменных элементов крови;
• донорство крови, обширная травма с кровотечением или проведение оперативных вмешательств, после которых красный костный мозг усиленно вырабатывает форменные элементы;
• резекция селезенки, которая является местом скопления погибших тромбоцитов;
• рак крови, который влияет на продукцию форменных элементов;
• нарушение красного костного мозга, который выделяет обширное количество мегакариоцитов.

При выявлении тромбоцитоза у пациентов необходимо проходить периодические обследования для контроля состояния. Большое количество кровяных пластинок вызывает образование кровяных сгустков, которые могут закупорить сосуд. Это приводит к некрозу тканей или органов.

Как нормализовать уровень тромбоцитов?

После выявления изменения количества кровяных пластинок врач назначает комплексное лечение для устранения состояния.

Для лечения тромбоцитопении рекомендуется придерживаться следующих правил:

• применение основ правильного питания, исключение из рациона жирной, острой, жареной, соленой еды;
• устранить возможность получения травмы;
• умеренные физические нагрузки, с помощью которых улучшается системный кровоток;
• употребление лекарственных средств, назначенных врачом, для повышения количества тромбоцитов в крови;
• употребление поливитаминов, улучшающих качество сосудистой стенки, обладающих общеукрепляющим действием;
• исключение из терапии препаратов, способствующих разжижению крови, уменьшению количества кровяных пластинок.

Если у пациента повышенное количество тромбоцитов, рекомендуется придерживаться следующих правил:

• снизить физические нагрузки, так как активный спорт может вызвать отрыв тромба и закупорку сосуда;
• употребление препаратов, способствующих разжижению крови, снижению количества тромбоцитов;
• применение поливитаминов, содержащих магний;
• диета с применением фруктов (гранат, черника) и овощей (свекла).

Диагностика крови по методу Фонио позволяет вычислить количество тромбоцитов. Исследование является достаточно информативным. Его часто применяют в клинических учреждениях. Для постановки точного диагноза проводят несколько анализов, чтобы исключить риск врачебной ошибки. После получения данных необходимо обратиться к врачу, чтобы он поставил диагноз и назначил лечение.

• Читайте подробный обзор всех методик подсчета количества тромбоцитов от врача.
• Екатерина Беликова, врач лабораторной диагностики, специально для Mirmam.pro